碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对多孔钽—软骨细胞复合物细胞增殖及分化影响的实验研究

来源 :河北联合大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangchao2005
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目的对比不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外对多孔钽-软骨细胞复合物细胞生长及增殖能力,检测bFGF增强软骨细胞表型维持,抑制去分化作用,从而探讨bFGF/多孔钽/软骨细胞复合物体内移植修复关节软骨缺损的理论依据。方法分离培养3周龄幼兔膝关节软骨细胞,II型胶原免疫细胞化学染色、番红-O(Safranin-O)特殊染色鉴定软骨细胞;取生长状态良好的第3代细胞分为5组:A组(1ng/ml bFGF/多孔钽/软骨细胞),B组(10ng/ml bFGF/多孔钽/软骨细胞),C组(50ng/ml bFGF/多孔钽/软骨细胞),D组(多孔钽/软骨细胞)及E组(单纯软骨细胞);MTT法检测不同浓度bFGF对多孔钽/软骨细胞生长及增殖状态;扫描电镜观察bFGF/多孔钽/软骨细胞复合物细胞形态及生长;I、II、IX、X型胶原免疫细胞化学染色以检测软骨细胞表型变化及去分化状态;实时荧光定量PCR检测软骨细胞II、X型胶原mRNA表达。结果1软骨细胞鉴定:II型胶原免疫细胞化学染色和Safranin-O染色均呈阳性反应,证实所分离培养的细胞为软骨细胞。2MTT法检测软骨细胞生长、增殖:不同时间点各实验组(A、B、C、D组)软骨细胞增殖与对照组(E组)相比较均有统计学差异(P<0.05),实验组(A~C)软骨细胞增殖明显增强,且10ng/mlbFGF/钽/软骨细胞组(B组)细胞增殖能力最强,同时各组间比较也存在统计学意义(P<0.05)。3扫描电镜观察结果:各组软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长、粘附,早期呈不等的球形,24小时后胞浆延展并向周围伸出多条突起,相互连接、延展向孔隙内部生长,细胞间相互融合,部分区域覆盖支架材料。4免疫细胞化学染色检测3,7天软骨细胞I、II、IX和X型胶原表达:10ng/ml bFGF/钽/软骨细胞组(B组) II和IX胶原免疫细胞化学染色呈强阳性,高于对照组(E组)(P<0.05),并且各组间比较也存在统计学意义(P<0.05);而10ng/ml bFGF/钽/软骨细胞组(B组)I和X型胶原免疫细胞化学染色呈弱阳性或阴性,与对照组或其它各组比较也存在统计学意义(P<0.05)。5实时荧光定量PCR检测3,7天软骨细胞II、X型胶原mRNA表达:各实验组(A~D组)II型胶原mRNA呈高表达,与对照组(E组)相比其表达量有统计学差异(P<0.05);而X型胶原mRNA表达量低于对照组(P<0.05)。结论1bFGF与多孔钽支架材料-软骨细胞共培养时,能促进软骨细胞增殖和正常表型的维持,并且能抑制软骨细胞去分化。210ng/ml bFGF是促进多孔钽-软骨细胞增殖,抑制其分化的最佳浓度。3bFGF可促进多孔钽/软骨细胞II型胶原mRNA的表达,抑制X型胶原mRNA的表达。说明bFGF/多孔钽/软骨细胞复合物可能成为软骨损伤修复材料而应用于临床。
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