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猪支原体肺炎(Macoplasmal pneumoniae of swine,MPS)是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)引起的一种长期危害养猪业的慢性、接触性传染病,并广泛分布于世界各国。同一猪群的发病率高达100 %,特别是在高密度饲养的规模化猪场,一旦爆发该病就难以控制,造成严重的经济损失。抗生素和疫苗都能对该病起到很好地治疗和预防作用。但是随着人们对食品安全的日益关注和致病菌耐药性的增强,使用抗生素防治该病已非明智之选;而在疫苗方面,由于国产弱毒疫苗在接种后两周内不能使用抗生素,同时需要进行肺内接种,技术要求较高,因此限制了它的推广应用;进口的灭活疫苗价格昂贵,一般养殖户很难接受。由于Mhp培养物的滴度较低,需要浓缩才能制造疫苗,所以科学家将目光集中在基因工程疫苗上,但目前在世界范围内尚未出现针对该病的商品化基因工程疫苗。本研究是在该实验室完成蜂胶纳米化和Mhp优化培养的基础上,首次对Mhp蜂胶佐剂灭活苗进行了研究。试验分为两大部分:试验一:对送检的疑似病料进行了MPS的诊断、分离和PCR鉴定,克隆出了该分离株的主要抗原蛋白基因,并进行了序列测定和氨基酸推导,将其结果与J株、232株、7448株的相应基因序列和氨基酸序列进行了比较分析;同时研究了分离株继代培养物变色单位(CCU)与PCR计数之间的相关性。结果表明该分离株是Mhp,其主要抗原基因P46和P65与J株、232株、7448株的同源性分别为98.47 %、98.37%、98.07 %和99.17 %、98.95 %、99.11 %,推导的氨基酸序列与J株、232株、7448株的同源性分别为98.36 %、98.36 %和98.03 %和98.67 %、98.83 %、98.83 %。CCU为107的Mhp培养物用PCR检测为阳性的最小稀释度为10-3,比所测到的CCU始终低4个滴度。试验二:将分离菌株提交给山东滨州畜牧兽医研究院,由其进行优化培养、浓缩后按沈志强专有技术合成Mhp蜂胶佐剂灭活苗。在该部分试验中,取三批该蜂胶佐剂灭活苗进行了安全性研究,并将其免疫效果与Mhp国产灭活苗和Mhp进口灭活苗进行了对比,结果发现:1.安全方面,蜂胶佐剂苗接种后对受试猪只的精神、饮食无不良影响;注射部位无肿胀和组织坏死;具有轻微地促生长作用,但是差异不显著(P>0.05);对繁殖性能无不良影响。2.效力方面,蜂胶佐剂苗能够快速、高效地启动体液免疫应答,在接种后第7天时抗体平均水平明显高于国产油苗组和进口疫苗组(P<0.05),但是在随后的56天里,各组间的抗体平均水平差异不大(P>0.05);淋转试验结果表明,蜂胶佐剂苗能够很好地激发动物机体的细胞免疫,蜂胶苗组的淋巴细胞刺激指数高于国产苗组(P<0.05),且略高于进口苗组(P>0.05)。试验结果初步提示我们该蜂胶佐剂苗安全有效,具有完全替代进口灭活苗的可能。