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背景:肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤,尤其在我国高发,其早期诊断及分子靶向治疗是主要的研究方向和热点。表观遗传学是一门研究基因表达的学科,最近的研究表明表观遗传学的异常改变不仅可以作为肿瘤早期诊断和预后的标志物,还可用于肿瘤的治疗。因此研究肝癌的表观遗传学改变及机制,对肝癌的早期诊断、预后和治疗具有重要的意义。
目的:分析肝细胞癌中Sox17基因的表观遗传学改变,探讨Sox17甲基化作为肝癌诊断的可能性;同时在肝细胞癌中研究Sox17基因在Wnt通路中的作用,明确其与肝细胞癌发生的关系,为肝癌的分子靶向治疗提供依据。
材料与方法:本研究采用的6种肝癌细胞株取自解放军总医院消化科实验室,分别为HepG2、SMMC7721、SNU449、L0.2、SK-Hep1和PLC—PRF-5,经5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶(5-aza—dc)处理前后的肝癌细胞株中Sox17基因的表达应用RT—PCR技术检测;同时肝癌细胞株Soxl7启动子区甲基化的情况应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测。62例人原发性肝细胞癌手术切除癌标本取自河南省肿瘤医院,癌组织中Sox17基因甲基化的情况应用MSP技术检测。4例人原发性肝细胞癌组织及配对的4例非癌肝组织标本取自河南省肿瘤医院、并经病理组织学证实,该组织中wnt信号通路β—catenin基因的表达应用免疫组织化学方法检测。
结果:应用半定量RT—PCR技术检测6种肝癌细胞株发现HepG2、SMMC7721、SNU449和L0.2表达Sox17 mRNA;而SK—Hep1和PLC—PRF-5无Sox17 mRNA表达。MSP结果显示SK—Hep1存在甲基化改变;而PLC—PRF-5和L0.2存在部分甲基化改变。HepG2、SMMC7721和SNU449这3种Sox17 mRNA弱表达的肝癌细胞株经去甲基化药物5-aza—dc处理后,Sox17基因的表达明显增强;并且MSP证实此3种肝癌细胞株均发生Sox17基因甲基化,表明启动子区甲基化调控Sox17基因表达。在62例人原发性肝细胞癌组织中51例(82.26%)发生甲基化。应用免疫组织化学方法分析4例人原发性肝细胞癌组织的β—catenin发现,Sox17甲基化的肝细胞癌标本β—catenin在胞核中表达明显增加;而Sox17非甲基化的非癌肝组织中β—catenin仅在胞膜和胞浆中表达。
结论:本研究中的6种肝癌细胞株Sox17基因存在甲基化改变,即受表观遗传学机制调控。在人原发性肝细胞癌中Sox17基因存在广泛甲基化,达82.26%;Wnt信号通路中β—catenin的表达与Sox17甲基化呈正相关,提示Sox17基因可能抑制β—catenin的表达。Sox17可能成为原发性肝癌早期诊断标志物,对于靶向治疗具有潜在的研究价值。