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背景及目的子宫内膜癌是原发于内膜的上皮性恶性肿瘤，是妇科生殖道最常见的恶性肿瘤之一。在欧美等西方国家，子宫内膜癌占女性恶性肿瘤的第4位，女性生殖道恶性肿瘤的第1位；在我国，其发病率近20年中也在不断上升。虽然内膜癌预后较好，但其发病率呈上升趋势且晚期内膜癌预后差，临床治疗手段有限。目前，其发生、发展的分子机制尚不清楚，所以，探讨其发生发展的分子机制和治疗的新靶点显得尤为重要。信号转导及转录活化因子（signal vansducer and activator of transcription，STAT）蛋白是转录因子家族成员，是细胞因子／生长因子途径下游的重要产物。这些多功能蛋白被磷酸化而活化后，可调节靶基因转录，成为潜在的生长控制因子和可能的致癌物，尤其是STAT3，它可以被经典的生长因子途径所激活，例如生长因子受体（GFR）途径，而且多种人类肿瘤中都有STAT3的异常激活，STAT3具有癌基因的功能。近年来，随着研究的逐步深入，我们已知STAT3及其活化蛋白在乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌，前列腺癌等多种常见恶性肿瘤中都存在异常表达，且阻断STAT3途径能不同程度的抑制肿瘤的发生与进展。那么，STAT3在子宫内膜癌中是否存在异常活化，影响该通路能否影响内膜癌的发生与发展及预后尚不十分清楚。基于以上考虑，本课题通过检STAT3活化蛋白（P-STAT3）和细胞增殖标记指数（Ki67）在正常子宫内膜及内膜癌中的表达，评估P-STAT3与内膜癌细胞增殖活性之间的关系及其临床意义，并进一步观察STAT3信号通路抑制剂（AG490）对内膜癌Ishikawa细胞增殖行为的抑制作用，为内膜癌的药物治疗方案更加合理化提供实验依据。材料与方法1．材料：组织标本与细胞组织标本：取自郑州大学第一附属医院病理科2002年1月～2004年12月手术及活检标本存档蜡块，其中包括：正常内膜组织16例（包括增生和分泌期内膜各8例），腺癌46例，患者年龄29～72岁，平均年龄55.79岁。按组织学分级分为：高分化23例，中分化8例，低分化15例，按1989年FIGO手术病理分期：Ⅰ期29例，Ⅱ期7例，Ⅲ～Ⅳ期10例，有淋巴结转移者6例。Ishikawa细胞：由天津医科大学总医院薛凤霞教授惠赠。将Ishikawa细胞置于含10％胎牛血清、100U／ml青霉素、100μg／ml链霉素的RPMI1640培养液中，于饱和湿度、37℃、5％CO2培养箱中培养使其贴壁生长。0.25％胰酶消化传代，实验均选用对数生长期细胞。2．免疫组织化学SP法检测P-STAT3和Ki67在子宫内膜癌中的表达情况。3．AG490对Ishikawa细胞增殖的影响：采用四唑单钠盐法（WST-1）检测不同浓度AG490（25、50、75、100μmol／L），顺铂（0.375、0.750、1.500、3.000μg／ml）单用及联用（AG490 75μmol／L+顺铂3.00μg／ml）对Ishikawa细胞的增殖抑制作用，并计算抑制率。4．统计学处理：所有数据均采用统计软件SPSS13.0处理，吸光度值（OD值）与Ki67表达用（?）±s表示。计数资料用（?）2检验，相关分析采用Spearman等级相关分析，组间比较采用方差分析。当P＜0.05时，认为有统计学差异。结果1．P-STAT3在内膜组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系：P-STAT3在内膜癌中的阳性表达率（76.09％，35／46）显著高于增生期（37.50％，3／8）（（?）2=4.867，p=0.027＜0.05）和分泌期内膜（25.00％，2／8）（（?）2=8.245，p=0.004＜0.01）。P-STAT3在高分化内膜癌中的阳性表达率（47.83％，11／23）与中、低分化内膜癌中的阳性表达率（86.96％，20／23）有显著差异（（?）2=8.013，p=0.005＜0.01）；早期（Ⅰ+Ⅱ期）与中、晚期（Ⅲ+Ⅳ）内膜癌中P-STAT3的阳性表达率分别为：58.33％，21／36；100％，10／10，两者相比，其差异有统计学意义（p=0.019＜0.05）。有淋巴结转移组中P-STAT3的阳性率表达率（83.33％，5／6）与无淋巴结转移组（67.50％，26／40）之间差异无统计学意义（p=0.647＞0.05）。2．Ki67在内膜癌中的标记指数显著高于增生和分泌期内膜，分别为（28.56±9.21）％，（0.22±0.05）％，0，其组间差异具有统计学意义（p=0.007＜0.01）。3．P-STAT3与Ki67的关系：35例P-STAT3阳性表达的内膜癌组织中Ki67标记指数为（26.48±11.56）％，高于11例阴性表达癌组织中的Ki67标记指数（9.84±4.09）％（P＜0.05），其差异有统计学意义。随P-STAT3阳性表达增加，Ki67阳性表达也明显增加，Spearman等级相关分析显示，两者呈正相关（r=0.693，P＜0.05）。4．AG490对Ishikawa细胞增殖的影响：AG490浓度为75μmol／L，顺铂浓度为3.0μg／ml时，可明显抑制肿瘤细胞增殖，抑制率接近50％，且均呈剂量依赖性。AG490+顺铂组对癌细胞的抑制作用更加明显，抑制率为66.79％，与单用AG490及顺铂组比较，差异有显著的统计学意义（P＜0.01）。结论1．正常内膜中存在STAT3的活化，但在内膜癌中过度活化，它的异常活化在子宫内膜癌的发生和发展中有重要作用。STAT3在内膜癌组织中的异常活化能促进细胞的恶性增殖。2．AG490与顺铂合用对Ishikawa细胞的抑制有协同效果，两药配伍应用比单用效果更好。