黄瓜芽黄突变体的蛋白组学研究

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目的:本实验以正常黄瓜和芽黄突变体黄瓜的1-6片真叶为研究对象,采用蛋白质双向电泳技术,对正常黄瓜与芽黄突变体黄瓜相对应叶片组织中总蛋白进行研究,检测两者蛋白质表达中存在的差异,然后应用MALDI-TOF-MS技术对筛选到的差异蛋白进行鉴定,从中寻找可能影响黄瓜黄化现象的相关蛋白质,从而为黄化突变体分子机制研究奠定了一定基础。方法:实验所需的正常黄瓜与突变体体黄瓜均是在相同环境下培养,依次采集第-至第六片真叶,液氮固样后,于-70℃冰箱保存备用。采用TCA-丙酮法分别提取正常黄瓜与芽黄突变体黄瓜的叶片组织的总蛋白质,准确进行定量后,进行双向凝胶电泳分析,将得到重复性较好的凝胶进行扫描后,应用PDQuest软件分析,寻找到差异表达蛋白后,对其中差异表达明显的蛋白点进行MALDI-TOF质谱分析。结果与结论:本实验成功建立了黄瓜芽黄突变体的双向电泳分析体系,为日后植物蛋白质双向电泳分析实验提供了技术平台。经软件分析,正常黄瓜叶片组织中检测到1047±38个蛋白点,突变体中为913±27。进一步分析得到了正常黄瓜与芽黄突变体黄瓜的差异表达蛋白63个,对其中22个蛋白点进行了MALDI-TOF质谱鉴定,其中芽黄突变体中上调表达的蛋白质有7个,正常黄瓜组织中上调表达的有6个,无明显差异的蛋白及看家蛋白9个。
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