产紫杉醇真菌的鉴定及疑似紫杉醇基因的克隆

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pantherzzx
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
紫杉醇是一种高效、低毒、广谱、作用机制独特的天然抗肿瘤药物。紫杉醇产生菌是一类内生真菌,主要指从红豆杉等树上分离出来的一类可产生紫杉醇的内生真菌。由于紫杉醇产生菌的发现为微生物发酵法生产紫杉醇提供了可能性,因此,对紫杉醇产生菌的研究近年来得到了广泛的重视。   本文首先对从哈尔滨、合肥等地分离自杉树、柏树、海棠的6株疑似紫杉醇产生菌(05a、07c、31b、48c、62c、71a)的紫杉醇产生能力进行了鉴定。经过TLC法初步鉴定,其发酵产物中含有与紫杉醇标准品具有相同迁移率(Rf值)的物质;HPLC分析结果表明产物中含有与紫杉醇标准品具有相同的保留时间的物质;经质谱进一步确定,该物质与紫杉醇标准品具有相同的相对分子质量。   随后分别对这6株菌进行了形态学和分子生物学鉴定。形态学分析表明05a、48c和62c属于链格孢属(Alternaria),07c属于毛壳菌属(Chaetomium),31b和71a属于拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)。之后分别提取这6株菌的基因组DNA,通过PCR方法扩增18S rDNA,PCR产物均约为1.8 kb。通过对PCR产物的测序分析发现,其结果与形态学鉴定结果完全一致,与相应属的标准株相比,其18S rDNA相似性均在97%以上。最后通过DNAMAN和ClustalW软件对此6株菌进行分子系统进化树的构建,进一步确定了其分类地位。   最后,通过反向PCR方法和RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)方法,克隆了一株源于产紫杉醇丝状真菌Pestalotiopsis sp.NK-17的T-DNA单拷贝插入突变株TX-79的突变基因。该突变基因与咪唑酮丙酸酶基因(HutI)具有高度同源性。HutI基因与微生物的次级代谢的生物合成、转运和催化有关,故此推测该突变基因与紫杉醇的生物合成可能存在密切的关系,该基因的缺失或插入失活将直接影响菌株的紫杉醇生产合成能力。本实验将为进一步研究真菌中紫杉醇合成途径及机制提供基础。
其他文献
目前,国内外对弯道水沙运动特性已进行了大量深入的研究,室内试验研究大多是针对等宽弯道进行的,而对山区河流独特的急弯放宽河段的水力特性研究甚少,所以开展急弯放宽河段室内试
在水能资源管理中,水电系统的发电优化调度是一个非常重要的研究领域。合理有效的水库水电站调度策略可以在考虑防洪、航运、灌溉等综合利用的基础上,通过对水库的控制来改变水能资源在时间和空间上的分布,以达到充分利用水能资源的目的,可获得非常可观的社会效益与经济效益。水电系统的发电优化调度也是一个非常复杂的数学优化问题。随着近年来水电站建设的增多,水电系统的规模越来越大,使得优化调度的求解也变得非常困难;同
摘要:情景教学法就是通过设计出一些真实性的、准确性的具体场合的情景和景象,为语言功能提供充足的实例,并活化所教语言知识,从而达到教学目的的一种教学方法。情景教学法在高中英语教学中发挥着重要的作用。它在英语教学中能够创设生动、丰富、形象的教学方式,对于提高高中学生学习英语的积极性和主动性,促进高中英语教学的全面发展发挥着重要的意义。本文就此探讨了高中英语情景教学。  关键词:〖HTF〗高中英语;情境
土石坝是传统的坝型,结构简单,易取材,是世界大多数国家坝工建设的主要坝型。其安全性分析方法的研究是目前坝工研究的热点。利用原位观测资料进行大坝材料反分析,进而预测大
湿地是一种自然资源,是处于陆地生态系统和水生生态系统过渡带的复杂的生态系统,它既具有某些陆地生态系统的特性,又具有一定水生生态系统的特性。其复杂的特性使得湿地一般都具
  针对传统浮选柱液位控制系统抗干扰能力不足、易沉槽的问题,通过在浮选柱加水管道上安装电动补加水阀,利用PLC处理系统采集实时数据,自动控制补加水阀,作为PID调节的辅助控制
  对某低品位含钛磁铁矿进行了矿石性质研究,并根据矿石性质进行了干式磁选预选、湿式磁选预选试验.对原矿进行中碎和细碎干式磁选预选可以预先抛出产率41.40%、铁品位13.14%
  对750万t/a地下矿山在厚大第四系富水矿床安全高效开采技术难点进行了分析,采用25 m分段向上扇形孔高阶段空场充填采矿方法,实现了特大规模矿山安全高效开采。
  越来越多的矿山企业采用充填采矿法,就在氯离子高腐蚀环境下如何建设充填站以及需要注意的充填体强度、防腐和耐磨等问题,并根据目前新材料、新技术方面考察提出经济可靠的
湖北省是水利大省,全省共建成水库(库容10万立方米以上)5859座,其中大型水库56座、中型水库232座,大型和中型水库数均列全国第一位。由于湖北省的水库主要建于大跃进时期和文革