肝癌是我国最常见的一种消化道恶性肿瘤，其死亡率仅次于胃癌，是我国第二位的癌症杀手。肝癌发病隐匿，病情进展快，恶性程度高，治疗效果欠佳，大部分病人在出现症状时就诊已属于中晚期，进一步增加了其治疗难度。因此，肝癌的早期诊断是提高患者生存率的关键，找出能快速准确地诊断早期肝癌的方法，为肝癌患者争取治疗时间、提高疗效成为目前学者们广泛研究的热点问题之一。目前临床上用于诊断肝癌的血清标志物较多，如甲胎蛋白（α－Fetoprotein, AFP）及甲胎蛋白异质体3（AFP-L3）等，但它们普遍存在敏感度低、特异性不足等问题，寻找新的、特异性更高的诊断早期肝癌的血清标志物具有重要的临床意义。MicroRNAs (miRNAs)是一类非编码RNA，它参与调节许多重要的生理过程，现有许多研究表明，miRNAs还广泛参与了肿瘤的发生、发展、侵袭，被认为是潜在的肿瘤生物标志物。作为miRNAs中的一种，miR-200a被证实在肝癌中表达下调，与肝癌的发生具有一定的相关性。截至目前，相关研究文献报道较少且结论不一致。本课题拟通过建立DEN诱导的大鼠肝癌模型，建模期间动态检测大鼠外周循环血中miR-200a与AFP的表达情况并进行比较，旨在为研究miR-200a能否作为肝癌早期诊断的血清标志物提供依据。同时收集了部分临床病例血样，进行了miR-200a的检测，进一步为本研究结果的分析提供临床参考。实验一：DEN诱导的大鼠肝癌模型的建立方法：F344大鼠50只，随机分为正常对照组(C组，n=10)、实验组(E组，n=40)。E组大鼠给予腹腔二乙基亚硝胺(DEN)注射，按体重30mg/kg给药，3天1次，至第12周时停药。C组给予相同剂量及频率的生理盐水腹腔注射。实验过程中观察实验动物一般情况变化。自第8周起至第16周，每两周分别随机取E组动物8只及C组动物2只。称重后麻醉，开腹行腹主动脉取血，每只取4-5ml用于后续实验检测。取出肝脏进行大体观察及组织学分析。结果：C组大鼠饮食正常，反应灵敏，被毛柔顺有光泽， E组动物随给药时间延长饮食量逐渐下降，反应迟缓，被毛乱而无光泽。C组体重（301.28±55.04）g。E组体重（247.31±29.90）g，二者差异具有统计学意义（P<0.01）。实验中E组动物死亡4只，死亡率为10%。C组动物无死亡。肝脏大体观察及病理结果显示，E组动物肝脏病变过程经历了肝纤维化期、肝硬化期、早期肝癌及晚期肝癌。结论：通过小剂量DEN腹腔注射的方法，成功建立了大鼠肝癌模型。实验二：血清miR-200a及AFP在大鼠肝癌发生过程中的动态表达比较分析方法：实时定量PCR技术检测C组及E组不同时期大鼠血清miR-200a的相对表达情况，ELISA法检测血清AFP动态变化，将二者表达情况进行比较分析。结果：与正常组及纤维化期大鼠相比，miR-200a在肝硬化期、肝癌早期、肝癌晚期的大鼠血清均有不同程度下调（P<0.05），AFP在肝癌早期、肝癌晚期的大鼠血清明显上调（P<0.05）。与肝硬化期大鼠比较，肝癌晚期大鼠体内的miR-200a表达显著下调（P<0.05），AFP在肝癌早期、肝癌晚期均显著上调。结论：血清miR-200a参与了肝癌发生、发展，对于肝癌发生各个阶段均具有指示作用，可作为肝癌预防和早期诊断的一个潜在标志物。实验三： miR-200a及AFP在肝癌、肝硬化患者血清中表达比较分析方法：临床收集正常肝、肝硬化、肝癌患者（各12例）血液标本。运用实时定量PCR技术检测血清miR-200a的相对表达情况，血清AFP水平从临床资料中提取。结果：临床标本分析结果显示，miR-200a在肝硬化及肝癌患者中均显著下调（P<0.05），AFP仅在肝癌患者中出现异常表达。结论：血清miR-200a对肝硬化及肝癌具有一定的临床诊断价值。