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FL作为Ⅲ型酪氨酸激酶受体的配体家族成员,是一种可溶形式或跨膜形式的蛋白,在各种组织细胞中表达,包括造血细胞和骨髓基质细胞。联合其他生长因子,FL能够促进干细胞、骨髓和淋巴祖细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞等的增殖或分化,是一种非常重要的造血因子。FL主要是激活其受体Flt3,通过不同的信号转导途径,导致控制造血细胞增殖分化以及其它过程的主要调节蛋白酪氨酸磷酸化。目前,FL作为一种非常有应用价值的细胞因子,主要应用在造血干细胞移植和抗肿瘤免疫治疗等方面。目的建立稳定分泌鼠抗人FL分子单克隆抗体的杂交瘤细胞株;研究抗体的生物学特性;建立人可溶性FL分子的ELISA检测方法。方法应用B细胞杂交瘤技术建立分泌抗人FL单抗的杂交瘤细胞株;快速定性试纸法鉴定单抗的亚类;体内诱生腹水法制备单抗;免疫亲和层析法纯化抗体;间接免疫荧光法分析单抗对细胞膜型FL分子的识别;竞争抑制实验分析单抗识别的抗原位点;建立可溶性FL分子的ELISA检测方法;在此基础上,分别对不同血清样本中sFL的含量进行定量分析。结果获取一株稳定分泌抗人FL分子单抗的杂交瘤,命名为2D2;快速定性试纸法鉴定2D2属小鼠IgG1亚类及κ型;经体内诱生腹水法制备单抗,小鼠腹水形成的阳性率为90%以上,腹水的收获量平均为7.4ml/只小鼠;经免疫亲和层析法纯化,腹水中抗体蛋白含量在1.2-4.7mg/ml之间;单抗2D2与FL-L929的结合率为85.2%,在肿瘤细胞U937和HL-60上的表达率分别为33.1%和39.2%,在其它检测细胞株上均为阴性表达;成功研制人sFL酶联检测试剂盒,灵敏度为7.8pg/ml。该试剂盒4℃放置3个月,离散度(CV%)<7.6%,加入rhFL/Fc重组蛋白后的回收率在97%～110%之间,提示该检测系统具有良好的灵敏度、稳定性和准确性,与国外商品化试剂盒的分析结果相似。应用该试剂盒测得的健康供血员、再障患者和白血病患者血清中sFL含量分别为328.6±42.89pg/ml; 2607±286.8pg/ml;1091±255.2pg/ml。结论本研究成功制备了功能性FL单抗,研制成灵敏、特异和稳定的人sFL酶标检测试剂盒,能够对血清中sFL进行准确定量分析,为基础研究和临床辅助诊断、疗效评估及预后判断提供依据,具有良好的应用前景。