论文部分内容阅读
抗人卵巢癌×抗人CD3单链双特异性抗体(AhOC×AhCD3)的一端能与卵巢癌抗原SKOV3特异性结合,而另一端能与T细胞表面抗原CD3结合,进而靶向激活T细胞免疫系统,裂解肿瘤细胞,对于人卵巢癌的免疫治疗有着广阔应用前景。通过可溶性表达的策略可既经济又简单地得到可溶的并且具有生物活性的。本课题首次确立了可溶性AhOC×AhCD3的分离纯化工艺,并尝试了可溶性AhOC×AhCD3的放大生产,以及研究了AhOC×AhCD3的部分性质。
小试过程中,通过优化DEAE离子交换层析和疏水作用层析这两步分离的操作条件,可以得到纯度为93﹪的AhOC×AhCD3产品,其回收率为20﹪左右。通过ELISA检测证明AhOC×AhCD3与SKOV3和Jurket抗原有很好的结合能力。
对AhOC×AhCD3的纯化进行中试放大。其操作步骤分别为盐析,DEAE离子交换层析以及疏水作用层析,通过对各步的条件优化,最后可得到纯度为90﹪的AhOC×AhCD3产品,其回收率为21﹪左右。将AhOC×AhCD3分离纯化与内毒素的去除相结合,主要采用层析法去除内毒素,最终AhOC×AhCD3产品的内毒素含量从109Eu/mg降为104-105Eu/mg。在DEAE离子交换层析过程中,使用高pH平衡体系可使产品内毒素含量降为102-103Eu/mg。
最后对AhOC×AhCD3的部分性质做了初步的研究,特别是关于蛋白质稳定性。AhOC×AhCD3的分子量为约58kDa,变性条件下的等电点为7.5±0.4。实验证明可溶性表达的AhOC×AhCD3是以一种多聚体的形式存在的,并且仍保留其生物活性,在低pH下可部分解聚,其溶解性随pH增高而增高。AhOC×AhCD3不稳定,易降解,其降解产物仍具有与抗原的结合能力。