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利用本实验室构建的花生丙酮酸羧化酶(PEPC)基因和脂肪酸脱氢酶（FAD2B）基因的RNAi植物表达载体，采用自创的植株注射法转化花生品种花育22号。运用近红外扫描技术分析籽粒脂肪酸、含油量和蛋白质含量，通过PCR、RT-PCR、ELISA技术对转化体进行鉴定。获得了蛋白质含量明显提高的花生转化体，对其T-DNA整合为点侧翼序列进行了克隆、分析。这是花生上应用T-DNA标签法的首次尝试。主要研究结果如下:
1、采用选择标记基因NTPⅡ特异引物PCR进行转基因检测，预期扩增片段长度为259bp。结果表明，在PCR检测的820粒花生种子中，用NTPⅡ特异性引物扩增出预期大小片段的有371粒，证实转化率为45.24％。随机选取了14个PCR检测呈阳性种子的PCR产物直接测序。测序结果经与已知序列比对证实全部是NTPⅡ基因的部分片段，说明目的基因已经整合进花生基因组中。
2、将测序的花生种子在光照培养箱中于28℃发芽。选取10粒种子进行后续试验，种子经严格消毒，种在灭菌的土中，最终成活8株，出苗后提取花生叶片RNA，进行反转录PCR检测，均扩增出预期长度的条带。序列分析表明该片段为NPTⅡ，证明该基因已整合入花生基因组中，并且可以正常转录成mRNA。
3、在上述基础上又进一步做了NTPⅡELISA验证。肉眼可见，样品孔有明显的颜色变化，阴性对照和空白对照则没有变化。使用伯乐酶标仪测得相应数据，说明样品孔中有NTPⅡ基因表达产物。ELISA结果证明，NPTⅡ已整合入花生基因组中，并且可以翻译成蛋白质。
4、经近红外扫描得到了蛋白质有明显变化且经PCR扩增呈阳性的花生种子，疑是插入突变引起蛋白质含量变化。通过DNAwalking技术获取左边界侧翼序列3条和右边界侧翼序列1条，经BLAST比对，在GenBank中找到有一定相似度的序列。