【摘 要】
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目的:构建含人乳腺癌DF3/MUC1启动子转录调控序列和白喉外毒素A链(DTA)基因的重组表达载体,同时探讨转入靶向DF3/MUC1的白喉毒素A链(DTA)基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响。
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目的:构建含人乳腺癌DF3/MUC1启动子转录调控序列和白喉外毒素A链(DTA)基因的重组表达载体,同时探讨转入靶向DF3/MUC1的白喉毒素A链(DTA)基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:利用PCR技术从人乳腺癌细胞MCF-7中扩增出DF3/MUC1启动子的转录调控序列并克隆入pGL3-Basic载体,构建重组质粒pGL3-DF3,将其瞬时转染DF3阳性的乳腺癌细胞株MCF-7和DF3阴性的乳腺癌细胞株MDA-MB-231,荧光素酶定量分析检测启动子的活性。从质粒pIBI30-DTA中切下DTA片断,以DTA基因替换重组质粒pGL3-DF3中的虫荧光素酶基因,构建重组质粒pGL3-DF3-DTA。将构建的pGL3-DF3-DTA真核表达质粒转染DF3阳性的乳腺癌细胞系,转染经RT-PCR证实目的基因已转入细胞内,24h后对转入基因的肿瘤细胞的生物学行为进行观察。结果:成功地构建了含人乳腺癌DF3/MUC1启动子转录调控序列和DTA的表达载体,酶切和测序结果与预期完全相符。体外实验证实转染阳性质粒pGL3-DF3-DTA的细胞生长速度明显减慢,细胞凋亡形态学观察到明显凋亡发生,流式细胞技术证实其凋亡率增加。结论:重组质粒pGL3-DF3-DTA构建成功。靶向DF3/MUC1的DTA可发挥其特异性的杀伤作用,抑制DF3阳性的乳腺癌细胞生长,对乳腺癌的基因治疗有潜在的应用价值。
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