【摘 要】
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蘑菇来源的β-葡聚糖具有广泛的生物活性,包括免疫调节、抗肿瘤、抗炎症、抗氧化、抗病毒、代谢调节等。目前,对于β-葡聚糖的构效关系规律认识不清晰,对于指导β-葡聚糖在医药与保健领域应用构成障碍。茯苓（Poria）为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos（Schw.）Wolf的干燥菌核。β-葡聚糖约占茯苓菌核干重的70%～90%,进行羧甲基化后,能够提升其生物活性。本文通过制备不同取代度及不同分子量羧
【基金项目】
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国家级重点研发计划（2017YFC1601003）
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蘑菇来源的β-葡聚糖具有广泛的生物活性,包括免疫调节、抗肿瘤、抗炎症、抗氧化、抗病毒、代谢调节等。目前,对于β-葡聚糖的构效关系规律认识不清晰,对于指导β-葡聚糖在医药与保健领域应用构成障碍。茯苓（Poria）为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos（Schw.）Wolf的干燥菌核。β-葡聚糖约占茯苓菌核干重的70%～90%,进行羧甲基化后,能够提升其生物活性。本文通过制备不同取代度及不同分子量羧甲基茯苓多糖（carboxymethyl-pachymaran,CMP）,探讨CMP结构（不同取代度和分子量）与免疫调节、抗炎、抑制肿瘤细胞增殖及抗氧化活性之间的关系。本文研究的主要实验内容及结果如下:（1）水媒法制备羧甲基茯苓粗多糖及活性验证:在水相体系中制备羧甲基茯苓粗多糖,多糖含量为80.3%,羧甲基取代度为0.46,对小鼠S180肿瘤的抑制率为27%,具有提高免疫抑制小鼠的单核巨噬细胞吞噬功能、迟发型超敏反应、溶血素生成、脾淋巴细胞增殖活性和NK细胞杀伤活性。（2）不同取代度及不同分子量CMP的制备及结构鉴定:通过调整CMP的制备工艺参数,分离获得不同取代度（0.13、0.32、0.95）及不同分子量Mw（5.93×10~4Da、11.58×10~4Da、26.02×10~4Da）的CMP,多糖含量在92%以上,且其不含蛋白及核酸;红外光谱结果表明制备的CMP均含β-型吡喃糖;核磁共振结果表明CMP样品由一种单糖组成,茯苓多糖的羧甲基基团引入程度依次为C-6、C-4、C-2;刚果红试验证明中等取代度及较大Mw对CMP维持三螺旋结构有利。（3）不同取代度及不同分子量CMP对免疫调节及抗炎活性的规律:利用RAW264.7巨噬细胞模型评价不同结构CMP对NO和TNF-α释放量的影响,不同分子量CMP均能激发RAW264.7巨噬细胞的免疫反应,其中中等分子量CMP活性最强,而低分子量CMP活性最弱;高取代度CMP促NO合成最有效,而中等取代度CMP促TNF-α合成效果最佳;用LPS诱导RAW264.7炎症模型中,中等取代度CMP对NO抑制活性最好,低取代度CMP对TNF-α抑制活性最佳;Mw越大对NO和TNF-α合成抑制作用越强。受体鉴定试验表明,Dectin-1是CMP的免疫作用受体之一。（4）不同取代度及不同分子量CMP对抑制肿瘤细胞增殖及抗氧化活性的规律:MTT法表明,中等取代度CMP对Hep G-2细胞抑制效果好;高分子量CMP有利于抑制Hep G-2细胞生长。DPPH法检测表明,中等取代度CMP清除DPPH自由基效果好,而低分子量CMP有利于清除DPPH自由基。本文通过不同取代度及不同分子量的CMP与活性关系研究,完善了β-葡聚糖的构效关系内容,为指导β-葡聚糖应用提供了实验依据。
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