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依托泊苷（VP-16）是P糖蛋白药泵（P-gp）和细胞色素P4503A代谢酶（CYP3A）的双重底物，P-gp的外排作用和CYP3A的代谢作用能明显降低VP-16的生物利用度。由于VP-16几乎不溶于水，并且脂溶性也不佳，为了促进VP-16的肠道吸收，本课题拟制备自微乳化释药系统（SMEDDS）以增加药物的溶解度。近年来，大量研究成果显示，药用辅料口服进入体内后，会对体内药物转运体及代谢酶系产生影响。本实验室在前期试验研究过程中，发现一些药用辅料对P-gp和CYP3A具有明显的抑制作用。据此，根据前期研究结果，本课题选择具有P-gp与CYP3A双重抑制作用的药用辅料Cremophor EL35、Cremophor RH40和Polysorbate80分别作为自微乳化释药系统SMEDDS-A、B、C的表面活性剂成分，三种SMEDDS均选择PEG400作为助表面活性剂。所用的油相为油酸乙酯（EO）和中链甘油三酸酯（MCT）两种。三种SMEDDS处方组成分别为：EO:Cremophor EL35:PEG400=25:50:25；MCT:Cremophor RH40:PEG400=14:43:43；EO:Polysorbate80:PEG400=25:50:25。经过质量考察，VP-16 SMEDDS经蒸馏水稀释后，粒径均在50 nm以下，电位在–4 mV至–13 mV之间。 为考察SMEDDS中辅料成分对肠道CYP3A的抑制作用，本课题采用大鼠肠微粒体和重组人CYP3A4酶（rCYP3A4）进行体外孵育研究。分别对孵育时间、微粒体蛋白浓度、VP-16浓度进行优化。通过酶动力学考察，在微粒体孵育体系下，得到VP-16的酶动力学常数km为39.68±6.01μg/mL，Vmax为39.70±2.78 pmol/min/mg protein；而在rCYP3A4孵育体系下，得到km为78.56±13.06μg/mL，Vmax为885.10±80.65 pmol/min/nmol rCYP3A4。通过进一步考察辅料对CYP3A4的抑制作用，得到辅料Cremophor EL35、Cremophor RH40、Polysorbate80和PEG400的IC50值分别为0.41、0.59、1.13和3.51 mg/mL。 为了考察VP-16 SMEDDS的在体吸收情况并探讨相关机制，本课题采用伴肠系膜静脉插管的大鼠小肠单向灌流模型，通过对VP-16的小肠吸收行为考察和SMEDDS对其小肠渗透性的影响来评价SMEDDS能否有效促进VP-16的肠道吸收。结果发现，SMEDDS-A、B、C均能不同程度地增加VP-16的小肠渗透性。并且，SMEDDS的稀释倍数越低，VP-16的有效渗透系数就越高。根据肠系膜静脉血中VP-16出现的量计算得到的渗透性结果显示，SMEDDS对P-gp和CYP3A的抑制作用、细胞膜流动性的改变以及胞吞等途径在SMEDDS增加药物生物利用度过程中起重要的作用。通过肠系膜静脉血中VP-16代谢物生成量的降低则直观地表明了SMEDDS对小肠CYP3A的抑制作用。 为进一步甄别P-gp抑制、细胞膜流动性改变以及胞吞等途径在SMEDDS促VP-16吸收过程中所起的作用，本课题进一步采用 Caco-2细胞模型进行相关机制研究。结果发现SMEDDS-A、B、C均能明显增加VP-16的细胞摄取率，并且SMEDDS的稀释倍数越低，摄取率越大，这说明在粒径变化不大的情况下，SMEDDS对VP-16摄取的促进作用存在剂量依赖关系。同时，与P-gp抑制的Caco-2细胞摄取结果进行比较，发现SMEDDS对P-gp的抑制作用在促药物摄取过程中起重要的作用。SMEDDS对P-gp ATP酶活性的影响试验结果则直接证明其对P-gp具有明显的抑制作用。胞吞抑制试验和胞内药物分布试验则表明，VP-16 SMEDDS能通过Clathrin依赖型胞吞途径被摄取。此外，SMEDDS对Caco-2细胞膜流动性的影响试验结果表明其可以通过增加细胞膜流动性方式增加药物摄取。因此，SMEDDS能通过多种途径促进VP-16的细胞摄取。 通过蛋白免疫印迹法考察SMEDDS在蛋白水平对P-gp与CYP3A1所产生的影响。结果表明，经多次灌胃给药后，大鼠小肠P-gp的表达量有所增加，可能是负反馈机制所致，而CYP3A1的表达量则明显被抑制。通过体内药动学考察结果，发现SMEDDS-A、B、C均能明显增加VP-16的口服生物利用度（分别增加了99.6％、31.6％、141.8％）。 综上所述，VP-16 SMEDDS-A、B、C均能明显促进药物的肠道吸收，增加其口服生物利用度。SMEDDS对P-gp和CYP3A的双重抑制作用在增加生物利用度过程中起到了重要作用，但细胞膜流动性改变和胞吞途径等也是其促药物吸收的部分机制。总之，使用具有P-gp药泵与CYP3A酶双重抑制作用的辅料制备SMEDDS，以增加其底物药物的生物利用度的方法可行、有效，为提高低生物利用度药物的疗效提供了一种新的思路。