氧化是造成脑功能障碍，记忆力降低和形成老年性痴呆的诱因之一。磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）具有增加记忆、抗老年性痴呆的作用。PS是通过抗氧化发挥其作用的吗?本论文以动物脑和海马神经元为实验材料验证PS的抗氧化作用。 1、动物脑组织中PS的薄层分离测定 以（VC氯仿）：V（无水乙醇）：V（三乙胺）：V（水）＝10：11.3：11.7：2.7为展开剂，以0.3％的溴百里香酚水溶液（P≥7）作为显色剂，对四种动物（牛、羊、鸡、鱼）脑组织中磷脂成分进行了薄层层析分离和扫描定量，每100g磷脂中PS的含量分别是20.5g，19.3g，18.7g，17.0g该法分离，显色效果好。 2、动物脑PS的提取、分离、纯化 采用有机溶剂萃取法，用9-12倍量的丙酮去除脑中95％的胆固醇，采用乙醚（或正已烷）从脑中提取99％的总磷脂，按乙醚液：Na2CO3溶液（PH=10）=1：1～4，搅拌均匀，二次冷冻，二次静置分层，底层的黄色溶液即为PS，经薄层分析检验知为单一成分。 3、动物脑PS的脂肪酸种类分析 对上述四种动物脑提取的PS分别进行甲酯化、然后用GLC分析，结果：冷冻干燥原料提取的PS比烘干脑原料提取的PS含更多的不饱和脂肪酸，四种动物脑均含有饱和脂肪酸（14：0，18：0），单不饱和脂肪酸（16：1，18：1），n—3多不饱和脂肪酸（18：3n，20：5n，22：5n，22：6n）和n—6多不饱和脂肪酸（18：2n，20：2n，20：3n，20：9n，22：4n，22：5n），而以鱼脑中多不饱和脂肪酸为最高达52.24。 4、PS抗H2O2引发的鼠脑功能障碍 有关记忆和脑功能障碍的研究人们普遍接受Morris（1984）的水迷宫实验。以Wistar雄性幼鼠为实验动物，动物分为8组：空白对照（A）组；15mg H2O2/kg/次/天（B）组，30 mg H2O2/kg/次/天（C）组，和30 mg PS/kg/次/天（D）组。和二个组先分别给15 mg H2O2/kg/次/天（E）组，30 mg H2O2/kg/次/天（F）组，6h后依次分别给同量的PS。另二个组先给15 mg PS/kg/次/天（G）组和30mg PS/kg/天（H）组，6h后依次分别给同量的H2O2，H2O2和PS稀释成0.3ml左右，腹腔注射，实验结果如下： ①D和A组相比，D组游泳时间最短（P<0.05），距离最短（P<0.05）。B、C和A组相比，B、C组游泳时间最长（P<0.01）游泳距离最长（P<0.01）E、F、G、H各组和A组相比，游泳时间较长，距离较长（P<0.01）。 ②HE染色后观察海马细胞。根据Satoru，等（1999）的死亡细胞分级（％）级别，A、D组为1级，B、E、F、H各组为2级，C组为3级。 ③鼠脑中成分的变化（1）脂褐素含量（u/g组织）A组219.2±7.5，C组422.6±87.2，B、E、F、G、H组脂褐素含量在249.8±82.5和343.6±72.3之间。而D组为93.7±38.5，表明了H2O2的氧化作用和PS的抗氧化作用。（2） MAO—B活化，A组为45，C组为100，D组为35。B、E、F、G、H各组在29—72之间，表明H2O2能引起脑单胺氧化酶升高，PS能降低单胺氧化酶的活性。（3） Ach含量。A组为14.3±3.22，C组为8.76±1.88，D组为17.89±3.71。B、E、F、G、H各组Ach在11.56±2.13到14.3+3.22之间。表明H2O2能降低Ach含量，PS能升高Ach含量。 5、PS抗H2O2引发的鼠海马神经元凋亡 新生大鼠（24h内）的海马神经元，加入1.5、15，150mg/L的PS预保护细胞24h后以10—2g/L H2O2刺激24h取样测定细胞凋亡率。 分别为27.17±2.05，16.17±2.21和37.17±2.45。表明了PS的抗凋亡作用。 用Confocal测细胞内Ca++浓度，分别为4.03±1.24，24.50±2.12和—（15±3.02）表明PS影响神经元的Ca++浓度，但过高浓度可能有损害作用。 本论文创新点： 1、从动物脑组织提取分离，纯化PS的方法和薄层分析方法。 2、从水迷宫实验及其鼠脑成分分析，H2O2能够造成脑氧化损伤。PS能抗H2O2引发的鼠脑受氧化损伤形成的功能障碍。 3、PS能抗H2O2氧化引发的海马神经元凋亡，这种拮抗作用与Ca++有关。