目的：　　多囊卵巢综合征（PCOS）及其生殖功能障碍与子宫内膜接受态和胚胎着床相关，该方面报道较少。研究发现，蛋白质糖基化可调节卵巢功能、介导母胎界面的识别和黏附以及胚胎着床，在生殖过程中发挥重要作用。蛋白质糖基化改变可引起子宫内膜接受性降低或胚胎植入能力下降，导致妊娠失败，引起女性不孕。　　本研究通过临床样品、细胞和动物模型，探讨PCOS发生发展过程中，生殖激素-α1，3岩藻糖基化-uPAR在卵巢-子宫内膜-胚胎轴中的表达调控及与生殖功能的相关性，为PCOS的临床诊断、治疗提供新的理论依据。　　方法：　　（一）生殖激素在PCOS中的作用及调控机制　　(1)孕激素对PCOS患者血清和卵巢颗粒细胞蛋白表达的调节作用　　1.蛋白芯片筛选差异表达的血清蛋白，EHSA和Western blot(WB)验证5种低丰度血清蛋白(EREG、inhibinβA、IDE、PDGF-D和KNG1)的表达,分析其与孕激素的相关性;　　2.CCK8、克隆形成实验检测细胞增殖能力，TUNEL、DAPI染色和WB检测细胞凋亡水平。　　(2)脱氢表雄酮下调尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)抑制卵巢颗粒细胞EMT的机制　　1.ELISA检测正常女性及PCOS患者血清中uPAR和睾酮水平，WB进一步验证，分析两者相关性;　　2.CCK8检测细胞增殖能力，Transwell检测迁移和侵袭能力，WB和明胶酶谱检测MMP2/9的表达和活性;　　3.显微镜观察细胞形态变化，Real-time PCR、WB和免疫荧光（IF）检测EMT标志物、uPAR、分泌型uPAR(suPAR)、PI3K/Akt和MAPK信号通路的激活;　　4.DHEA诱导PCOS大鼠模型，免疫组化(IHC)检测大鼠卵巢组织中uPAR、PCNA和EMT标志物的表达。　　(3)ANP促进NPRA/PGRMC1/EGFR复合物形成影响卵巢颗粒细胞增殖和凋亡功能的机制　　1.ELISA检测ANP和激素水平，Real-time PCR和IHC检测ANP表达，扫描电镜观察子宫内膜表面微绒毛，IF、Real-time PCR、WB和IHC检测NPRA/C和PGRMC1表达;　　2.ELISA检测细胞培养上清中睾酮、孕激素和雌激素水平，CCK8、克隆形成实验、WB和IF检测细胞增殖功能，TUNEL、DAPI染色和WB检测凋亡功能;　　3.免疫共沉淀和WB检测PGRMC1和NPRA表达，及PCNA和MAPK/ERK信号通路，IHC和WB检测PCNA和AP1(p-c-Fos和p-c-Jun)表达。　　（二）α-1，3岩藻糖基化对子宫内膜接受态形成的调控机制研究　　1.Real-time PCR检测血清中miR-200家族（miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429）的表达，ROC曲线分析诊断价值，分析岩藻糖基转移酶Ⅳ(FUT4)和miR-200c的相关性;　　2.CCK8、克隆形成实验检测细胞增殖功能，扫描电镜观察细胞表面微绒毛，细胞黏附实验分析细胞黏附功能;　　3.软件预测miR-200c与FUT4结合位点，双荧光素酶基因报告实验检测细胞双荧光素活性，Real-time PCR、WB和IF检测FUT4表达;　　4.免疫共沉淀和WB检测α-1，3岩藻糖基化(LTL、LeY)以及Wnt/β-catenin信号通路;　　5.利用小鼠早孕模型，计算孕第9天小鼠胚胎着床数，Real-time PCR、荧光原位杂交和IF检测小鼠子宫内膜中miR-200c、FUT4、LTL和LeY表达，扫描电镜观察子宫内膜表面微绒毛和吞饮泡，IHC检测PCNA和Wnt/β-catenin信号通路。　　（三）uPAR分子促进胚胎着床的机制研究　　(1)胚胎滋养层细胞uPAR表达及在侵袭过程中的作用机制　　1.IHC、WB、Real-time PCR和IF检测uPAR表达;　　2.绒毛体外培养和Transwell检测细胞迁移和侵袭功能，明胶酶谱检测MMP2活性，WB检测TIMP1/2表达，CCK8检测细胞增殖功能，WB检测细胞凋亡功能和uPAR表达。　　(2)uPA/uPAR上调FUT4表达及促进滋养层细胞侵袭的作用　　1.IHC、WB和IF检测AP1表达和MAPKs信号通路;　　2.Real-time PCR、WB和IF检测uPAR、FUT4、LTL和LeY表达;　　3.EMSA和ChIP检测FUT4启动子与AP1的结合;　　4.Transwell检测细胞迁移和侵袭功能。　　结果：　　（一）生殖激素在PCOS中的作用及调控机制　　(1)孕激素对PCOS患者血清和卵巢颗粒细胞蛋白表达的调节作用　　1.PCOS患者和正常育龄女性血清中孕激素和蛋白表达存在差异;孕激素、EREG、inhibinβA、IDE、PDGF-D和KNG1在PCOS患者血清中表达降低，孕激素与五种细胞因子变化呈正相关;　　2.孕激素上调卵巢颗粒细胞中EREG、inhibinβA、IDE、PDGF-D和KNG1表达;EREG和inhibinβA促进卵巢颗粒细胞增殖，并抑制凋亡。　　(2)脱氢表雄酮下调尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)抑制卵巢颗粒细胞EMT的机制　　1.PCOS患者血清中uPAR表达降低;　　2.DHEA通过抑制uPAR/suPAR表达和PI3K/Akt及MAPK信号通路的激活，抑制卵巢颗粒细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。　　(3)ANP促进NPRA/PGRMC1/EGFR复合物形成影响卵巢颗粒细胞增殖和凋亡功能的机制　　1.ANP在PCOS患者和PCOS大鼠中表达降低，ANP治疗后改善卵巢形态和功能;　　2.RU486通过下调PGRMC1表达抑制卵巢颗粒细胞增殖，并促进凋亡;　　3.ANP通过上调NPRA/C表达促进卵巢颗粒细胞增殖，并抑制凋亡;　　4.ANP通过促进NPRA/PGRMC1/EGFR复合物形成、MAPK/ERK信号通路和AP1激活，促进卵巢颗粒细胞增殖。　　（二）α-1，3岩藻糖基化对子宫内膜接受态形成的调控机制研究　　1.miR-200家族在不孕和流产患者血清中表达升高，而FUT4表达降低，miR-200c和FUT4在不孕症患者血清中表达呈负相关;　　2.miR-200c抑制子宫内膜上皮细胞增殖和黏附能力;　　3.FUT4是miR-200c的靶基因;　　4.miR-200c通过抑制CD44糖蛋白上的α-1，3岩藻糖基化和Wnt/β-catenin信号通路的激活，抑制子宫内膜上皮细胞增殖和黏附;　　5.小鼠体内实验证实miR-200c通过下调FUT4/α-1，3岩藻糖基化抑制子宫内膜接受态形成和胚胎着床。　　（三）uPAR分子促进胚胎着床的机制研究　　(1)胚胎滋养层细胞uPAR表达及在侵袭过程中的作用机制　　1.uPAR在正常妊娠女性胎盘绒毛和滋养层细胞中的表达高于先兆流产患者;　　2.uPAR siRNA抑制滋养层细胞增殖、迁移和侵袭;　　3.LIF通过上调uPAR激活PI3K/Akt信号通路，促进滋养层细胞侵袭。　　(2)uPA/uPAR上调FUT4表达及促进滋养层细胞侵袭的作用　　1.AP1在正常妊娠女性绒毛和血清中表达高于先兆流产患者;　　2.uPA/uPAR通过JNK信号通路促进p-c-Fos、p-c-Jun和FUT4表达;　　3.uPA/uPAR激活AP1活性，增加FUT4转录及表达，促进滋养层细胞迁移和侵袭。　　结论：　　1.多囊卵巢综合征(PCOS)患者和正常育龄女性血清蛋白表达存在差异，孕激素上调EREG和inhibinβA表达，EREG和inhibinβA可作为低孕激素PCOS患者的潜在血清学标志物;　　2.脱氢表雄酮(DHEA)通过下调uPAR/suPAR表达，抑制PI3K/Akt和MAPK信号通路的激活，抑制卵巢颗粒细胞增殖、迁移、侵袭和EMT;　　3.ANP通过促进NPRA/PGRMC1/EGFR复合物的形成，激活MAPK/ERK信号通路和转录因子AP1，改善卵巢功能;　　4.子宫内膜接受态的形成与α-1，3岩藻糖基化有关;　　5.miR-200c通过靶向FUT4和CD44糖蛋白上的α-1，3岩藻糖基化，抑制子宫内膜接受态形成;　　6.miR-200c和FUT4可作为子宫内膜接受态的潜在标志物，以及不孕症诊断和治疗靶点;　　7.胚胎滋养层细胞有uPAR表达;　　8.LIF通过上调uPAR表达，激活PI3K/Akt信号通路，促进滋养层细胞增殖、迁移和侵袭;　　9.uPA/uPAR激活AP1，上调FUT4表达，并促进滋养层细胞侵袭。