糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D（Glycosylphospha-dylinositol-specific phospholipase D，GPI-PLD）可在特定的条件下水解糖基化磷脂酰肌醇（GPI）中肌醇磷酸脂键，释放细胞膜上的锚定蛋白，从而调节细胞膜上GPI锚定蛋白的表达，影响细胞的功能。许多与细胞粘附有关的膜蛋白通过共价键与GPI结合，锚定于包括造血细胞的多种细胞膜上。这些GPI锚定蛋白在白细胞的粘附、迁移及肿瘤细胞的浸润、转移过程中发挥着重要作用。现有的研究表明，造血细胞既能合成GPI-PLD，又有GPI锚定蛋白的表达，其中部分GPI锚定蛋白又是细胞粘附分子。新近研究表明，造血干细胞移植后归巢以及白血病细胞的髓外浸润过程均涉及到细胞之间的识别、粘附、迁移等相互作用。GPI-PLD在一些实体瘤细胞的浸润转移中扮演重要角色。造血干／祖细胞（hematopoietic stem／progenitor cells，HS／PC）归巢、白血病细胞的髓外浸润同样需跨过基底膜及血管内皮细胞，与实体瘤的浸润转移存在着许多类似的过程。因此，GPI-PLD是否在这些的过程中发挥相似的作用，引起了广泛的关注。我们在原有的工作基础上，进一步探讨了来源于脐血（UCB）、骨髓（BM）和动员后外周血（MPB）中的CD34⁺细胞以及髓性白血病细胞株，如K562、HL-60和THP-1细胞中GPI-PLD和相关GPI锚定粘附分子的表达及其与细胞粘附、迁移性的关系；通过体外调节GPI-PLD酶活性，观察其对这些正常和异常造血细胞粘附、迁移等功能的影响并探讨其可能的机制。首先，我们采用免疫磁珠分选体系（MACS）分选来自UCB、BM及MPB中的CD34⁺细胞，并采用半定量RT-PCR分析这些不同来源的CD34⁺细胞GPI-PLD的表达水平；然后，用GPI-PLD抑制剂1，10-二氮杂菲处理UCB、BM和MPB CD34⁺细胞，并分析其对这些细胞的粘附、迁移、细胞膜GPI锚定蛋白CD48和CD90的表达以及细胞周期的影响。结果显示，MPB来源CD34⁺细胞GPI-PLD mRNA低表达，而UCB和BM来源的CD34⁺细胞GPI-PLD mRNA不表达或极低表达。1，10-二氮杂菲对UCB、BM和MPB CD34⁺细胞的粘附率、锚定蛋白CD48、CD90表达以及细胞周期无明显影响（P值均大于0.05）。经0.5mmol／L 1，10-二氮杂菲理处理1h后，UCB和MPB CD34⁺细胞的自发迁移率和诱导迁移率明显下降，而BM来源的CD34⁺细胞无明显改变。同时，我们采用RT-PCR、Western blot、流式细胞术和免疫细胞化学法分析了三种髓性白血病细胞GPI-PLD、uPAR的mRNA和蛋白表达；随后采用粘附、侵袭实验分析并比较了三种细胞的粘附、侵袭性。结果显示，THP-1细胞中GPI-PLD和uPAR的mRNA及蛋白质表达水平均明显高于K562和HL-60细胞。THP-1细胞对Fn的粘附率显著高于K562、HL-60细胞；THP-1与HL-60细胞体外穿膜侵袭能力显著高于K562细胞。为进一步探讨GPI-PLD对髓性白血病细胞THP-1粘附和侵袭功能及GPI锚定蛋白uPAR表达的影响及可能的作用机制。我们分别采用GPI-PLD的特异性抑制剂—1，10-二氮杂菲、酶活化剂—葡萄糖+胰岛素来分别处理白血病细胞GPI-PLD的活性。然后，通过体外粘附、侵袭实验检测细胞的粘附、侵袭能力变化；流式细胞术检测细胞膜锚定蛋白uPAR表达的变化。并采用RT-PCR和Western blot法检测处理前后THP-1细胞中GPI-PLD的表达情况。结果显示：经0.5mmol／L1，10-二氮杂菲处理4h后，三种细胞中仅THP-1细胞的粘附率和膜uPAR的表达明显上调，差异有统计学意义；但THP-1细胞中GPI-PLD的表达并无明显改变。经葡萄糖+胰岛素(16.7mmo／L+10^-7mol／L)诱导24h后，仅THP-1细胞的粘附、侵袭性和膜uPAR的表达明显下调，差异有统计学意义；并且该细胞中GPI-PLD的表达亦出现上调。以上这些结果表明，在HS／PC中低表达或不表达GPI-PLD，这可能意味着GPI-PLD与HS／PC粘附和迁移能力没有密切关系，GPI-PLD并不参与HS／PC的粘附和迁移。而在THP-1细胞中，GPI-PLD和uPAR的表达明显高于K562和HL-60白血病细胞，并且GPI-PLD活性改变可调节细胞膜uPAR的表达，这提示GPI-PLD可能参与THP-1细胞的粘附和侵袭，其机制可能与其调节uPAR的表达有关。为进一步研究HS／PC归巢，提高临床移植成功率，以及白血病细胞髓外浸润的防治提供了新的实验基础和研究方向。