本课题通过基因工程方法克隆Bacillus sp.QYW-1β-甘露聚糖酶目标基因，并通过外源载体的高效表达获得大量目的蛋白，消除了代谢调控机制对β-甘露聚糖酶基因的影响，获得稳定的工程菌，酶蛋白产量显著提高，酶活相对增加，为β-甘露聚糖酶的工业化生产奠定了研究基础。通过平板筛选，采用刚果红染色法从魔芋地土壤中筛选出7株产β-甘露聚糖酶的优良菌株，DNS法测定酶活，筛选出酶活最高的一株菌作为出发菌株；综合形态观察、生理生化性质鉴定及16S rRNA序列相似性结果表明为一株芽孢杆菌，实验室命名为Bacillus sp.QYW-1（GenBank登录号JX524224）。根据16S rRNA序列比对结果，设计引物，采用PCR扩增技术，以Bacillussp.QYW-1基因组DNA为模板，克隆获得一段1084bp的β-甘露聚糖酶基因manW（GenBank登录号JX869490），软件分析表明：其编码360个氨基酸，分子量为40kDa，属于糖苷水解酶家族26；SignalP4.0软件分析该序列含有一段25个氨基酸的信号肽，将优化设计的Bacillus sp.QYW-1β-甘露聚糖酶的成熟肽编码序列插入Pichia pastoris表达栽体pPIC9K中，并位于α-因子信号肽序列的下游，获得重组质粒pPIC9K-manW；Sac I酶切线性化，电转化Pichia pastoris菌株GS115中。经MM和MD平板筛选及PCR鉴定，获得高效表达β-甘露聚糖酶的毕赤酵母重组茵株MANW1。重组菌稳定性试验表明：传代15次的重组菌依然具有较高酶活，说明manW基因并未丢失，重组菌具有良好的遗传稳定性。对重组菌株进行发酵条件优化和酶学性质研究，摇瓶发酵结果表明：该酶最适pH6.5，最适温度37℃，具有良好的热稳定性和耐酸性，酶活达1200U/mL。