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前言 肿瘤的发生、发展及转移是一个涉及多方面、多因素、多阶段、复杂的演化过程。其中细胞周期素D1(Cyclin D1)和细胞周期素依赖蛋白激酶4(Cyclin-dependent kinase 4,CDK4)与癌变的关系十分密切，目前已在人类多种肿瘤中发现其蛋白质过表达。 CyclinD1是细胞周期素家族中的主要成员，基因定位于染色体11q13，调控细胞周期由G1进入S期。人类恶性肿瘤中，常常出现CyclinD1细胞周期调控蛋白的异常表达，导致肿瘤的发生发展。CDK4编码基因位于染色体12q，对调节细胞周期也起重要作用。在G1期末，CyclinD1与CDK4结合，可使视网膜母细胞瘤易感基因(retinoblastoma,Rb)的蛋白产物pRb磷酸化。在G0期和G1期，pRb表现为低磷酸化或去磷酸化，从而能阻止细胞周期进入S期。而由CyclinD1和CDK4结合所导致的pRb磷酸化可导致其失活，推动细胞周期的进程。 近年大量研究证实CyclinD1和CDK4在一些恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要作用，并与这些肿瘤的预后有关。检测非小细胞肺癌(NSCLC)中CyclinD1和CDK4表达对研究其生物学行为以及探讨二者在恶性肿瘤的发生、发展中的作用可能有较重要的实际意义。本试验采用免疫组化方法研究CyclinD1、CDK4在肺腺癌、鳞癌中的表达状况，并探讨其临床意义。 实验材料与方法 一、实验材料 标本来源：收集中国医科大学附属第一医院胸外科1998年一2002年的刀例肺癌手术标本，均经过病理确诊。男性54例，女性23例；年龄37－78岁，平均61．2岁。肺腺癌36例、肺鳞癌41例。分化程度：高分化23例，中分化ZI例，低分化33例。淋巴结转移情况：N／3例，N／ 3例，Nf 例。并选取 10例同期肺良性病变（肺结核3例、支气管扩张症7例）手术标本。所有标本均经10％甲醛固定，石蜡包埋。所有肺癌患者术前均未行放疗、化疗。 主要仪器：英国产BRIGHT5040型切片机，格兰仕牌微波炉，OMMPUS－BHZ显微镜等。 试剂：即用型鼠抗人 CyclinD单克隆抗体由北京中山生物技术有限公司提供，工作浓度1：50。鼠抗人CDK4单克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，购自北京中山生物技术有限公司，工作浓度为乙50。免疫组化试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。DAB显色试剂及其他常规试剂由中国医科大学胸科实验室提供。 二、实验方法 S—P免疫组化染色：所有蜡块标本连续 5 urn切片一脱蜡一灭活一抗原修复一免疫组化染色一复染一脱水一封片。 结果判定：CyclinDI以细胞浆和（或）细胞核出现棕黄色颗粒为阳性，CDK4以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性。每例标本随机观察10个高倍视野，各计数100个肿瘤细胞中阳性细胞所占的比例。无明显阳性细胞为阴性（一厂阳性细胞数小于 20％为弱阳性（十太阳性细胞数大于 20％为阳性（＋十人其中弱阳性表达（＋）归人阴性（一）中。最终结果是由两位病理医师用双盲法分别观察每例切片所获得的一致意见。 ·2· 统计学分析：采用卡方检验，P＜0．05为差异有显著性统计学意义，P北．of为差异有非常显著性统计学意义。 实验结果 1．CyclinDI．CDK4在肺良性病变组织中不表达，在肺腺癌＼鳞癌中，阳性表达率分别为 54．5％（42刀7）和 72．7呢（56／77），统计学分析示二者在肺良性病变组织和肺腺癌、鳞癌间存在明显差别（P＜0．01）。42例 CyClinDI 阳性表达者，12例为细胞核阳性表达，30例为细胞浆阳性表达。 L对77例肺腺癌、鳞癌的临床病理参数与CyclinDI的表达进行研究，结果表明 CyclinD表达与患者年龄、性别、组织学类型等均无明显关系。高、中、低分化程度的肺腺癌＼鳞癌中CyclinDI的表达率分别为30．4％门／23）、、47．6％（10／21）、75．8％（25／33），其组间存在非常显著的差异（P＜0．0＊。在无淋巴结转移的肺癌中，CyClinDI阳性率为41．9％门 ＊而有淋巴结转移的肺癌中，其阳性率为 70．6％（24／34），两者相比有显著差异（P＜0．05）。CyclinD在细胞核和细胞浆阳性表达者，其淋巴结转移率分别为83．3啪（10／12）和 46．7％ （l／30），两者相比有显著差异（P＜0．05）。 3．CDK4表达与患者年龄、性别、组织学类型等均无明显关系。高、中、低分化程度的肺腺癌＼鳞癌中CDK4的表达率分别为47．8的（JI／23）、71．4％（15／ZI）、90．9啪（30／33），其组间存在非常显著的差异（P＜0．01人在无淋巴结转移的肺癌中，C＊K4阳性率为53．5％汪3／43人而有淋巴结转移的肺癌中，其阳性率为85．3％p904人两者相比有非常显著差异O＜o．01人 ·3· 讨 论 细胞周期控制点＊heck point）是细胞周期循序进展的关键部位，决定着DNA复制及细胞分裂的起始与完成两个方面。由细胞周期蛋白（Cyclin入细胞周期素依赖蛋白激酶CDK及其抑制因子CKI组成的Cyclin－CDK－CKI系统共同构成了?