豚鼠阴茎海绵体ICC样细胞与NO通路的关系初探

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目的:对豚鼠阴茎海绵体组织冰冻切片及体外阴茎海绵体Cajal样间质细胞(ICC样细胞)培养,利用免疫荧光技术及激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术,观察豚鼠阴茎海绵体组织中ICC样细胞与一氧化氮合酶(NOS)阳性神经的组织学联系,初步探讨ICC样细胞在阴茎勃起信号NO的释放和传递中的作用。  方法:本实验利用c-kit/nNOS和c-kit/cGMP免疫荧光双重染色技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察阴茎海绵体组织中ICC样细胞及NOS阳性神经的形态学特征及其之间的组织学联系特点,并通过混合酶(胶原酶和胰酶)消化法分离培养豚鼠阴茎海绵体ICC样细胞及c-kit/nNOS和c-kit/cGMP免疫荧光双重染色,利用激光扫描共聚焦显微镜技术检测nNOS和cGMP在阴茎海绵体ICC样细胞中的表达情况。  结果:豚鼠阴茎海绵体组织切片免疫荧光显示c-kit阳性细胞多分布在阴茎海绵体平滑肌小梁边缘,纺锤形,大约20-50μm长,10μm宽,具有长的突起,胞体呈圆形或椭圆形;NOS阳性神经广泛分布于阴茎海绵体组织中,以海绵体平滑肌层分布居多,呈圆点状或不规则形。c-kit/nNOS和c-kit/cGMP免疫荧光双重染色显示阴茎海绵体组织ICC样细胞上表达nNOS和cGMP,豚鼠阴茎海绵体平滑肌组织中局部NOS阳性神经主干周围分布有大量c-kit阳性细胞,呈星状分布,两者组织学联系紧密。混合酶酶解法成功培养出相对纯化的阴茎海绵体ICC样细胞,24h后贴壁良好,48h后细胞状态趋于稳定,可用于细胞鉴定,c-kit/nNOS和c-kit/cGMP荧光双重染色显示培养的ICC样细胞上也表达NOS和cGMP。  结论:豚鼠阴茎海绵体组织中存在ICC样细胞和NOS阳性神经,两者在组织学上具有密切联系,可能共同参与阴茎勃起功能的调控,为“神经一ICC样细胞一平滑肌”作用单元的形成提供了结构基础。混合酶消化法可分离、提取出相对纯化的阴茎海绵体ICC样细胞,为进一步对阴茎海绵体ICC样细胞的功能研究提供了有利基础。
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