白英药材的质量控制方法研究

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本研究以白英药材为研究对象,对其总皂苷、总黄酮、总生物碱、薯蓣皂苷元、6种酚类化合物进行了定量分析,对其指纹图谱进行了初步研究,并研究了其体外抗肿瘤活性。具体内容如下:1.建立了白英总皂苷的含量测定方法:采用正交试验设计方法,以总皂苷含量为评价指标,对盐酸浓度(mol·L-1)、乙醇体积分数(%)、水解时间(h)3个因素进行优化,确定了白英中总皂苷的最佳提取工艺;用高氯酸显色,以薯蓣皂苷元为对照,UV-Vis法测定了19批白英中总皂苷的含量。薯蓣皂苷元在8.91~29.70μg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为95.9%(RSD=1.5%)。2.建立了白英总黄酮的含量测定方法:采用正交试验设计方法,以总黄酮含量为评价指标,对乙醇体积分数(%)、提取次数和提取时间(h)3个因素进行优化,确定了白英中总黄酮的最佳提取工艺;用三氯化铝显色,以芦丁为对照,UV-Vis法测定了21批白英中总黄酮的含量。芦丁在5.48~21.92μg·mL-1范围内线性关系良好,方法的平均回收率为96.7%(RSD=1.1%)。3.建立了白英总生物碱的含量测定方法:采用正交试验设计方法,以总生物碱含量为评价指标,对乙醇体积分数(%)、提取次数和乙醇体积(mL)3个因素进行优化,确定了白英中总生物碱的最佳提取工艺;用酸性染料比色法测定白英中总生物碱的含量,以士的宁为对照,0.001mol·L-1的溴麝香草酚蓝为酸性染料,在pH4.0缓冲液中用三氯甲烷萃取,再用0.01mol·L-1 KOH的乙醇液碱化,在600nm处测定溶液的吸光度值。测定了21批白英中总生物碱的含量。士的宁在10.20~35.70μg·mL-1范围内线性关系良好,方法的平均回收率为99.3%(RSD=1.3%)。4.建立了白英薯蓣皂苷元的含量测定方法:采用正交试验设计方法,以薯蓣皂苷元含量为评价指标,对乙醇体积(mL)、硫酸浓度(mol·L-1)、水解时间(h)3个因素进行优化,确定了白英中薯蓣皂苷元的最佳提取工艺;采用HPLC-UV测定了20批白英中薯蓣皂苷元的含量。选用Hypersil ODS2(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈-水(80:20,V/V);流速:1.0mL·min-1;检测波长:210nm;柱温:40℃。薯蓣皂苷元在20.1~402μg·mL-1。范围内线性关系良好,平均回收率为96.7%(RSD=1.6%)。5.建立了同时测定白英中6种酚类化合物的含量测定方法:采用正交试验设计方法,以原儿茶酸、绿原酸、香草酸、咖啡酸、阿魏酸和芦丁6种组分的含量为评价指标,对乙醇体积分数(%)、提取次数、乙醇体积(mL)3个因素进行优化,确定了白英中上述6种组分的最佳提取工艺;采用HPLC-UV同时测定了21批白英中上述6种组分的含量。选用Diamonsil C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:A(0.3%HCOOH水溶液)与B[甲醇-乙腈(4:1,V/V)]梯度洗脱;流速:0.8mL·min-1;检测波长:254nm;柱温:20℃。原儿茶酸、绿原酸、香草酸、咖啡酸、阿魏酸和芦丁的线性范围分别为0.14~6.30μg·mL-1、8.80~396μg·mL-1、0.78~35.28μg·mL-1、0.42~19.08μg·mL-1、0.43~19.44μg·mL-1和3.20~144μg·mL-1,方法的平均回收率分别为98.2%(RSD=1.4%)、100.1%(RSD=1.5%)、97.8%(RSD=1.1%)、98.2%(RSD=0.6%)、99.7%(RSD=0.8%)和99.1%(RSD=0.6%)。6.建立了白英HPLC指纹图谱:采用RP-HPLC法,选用Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:A(0.2%HCOOH水溶液)与B(乙腈)梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:270nm;柱温:25℃。建立了白英的HPLC指纹图谱。用SPSS13.0软件对21批药材指纹图谱进行系统聚类分析,根据聚类分析结果将白英分为4类,结合聚类分析结果和药材主产地,选定其中12批样品建立共有模式。并应用“中药指纹图谱相似度评价系统”对各产地药材进行了质量评价。7.研究了白英乙醇提取物的抗肿瘤活性:采用MTT法,选取体外培养的人宫颈癌Hela细胞为模型,以半数抑制浓度(IC50)为指标,考察了18批白英对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用。结果表明,不同来源的白英出膏率、体外增殖抑制效果有差异,白英药材出膏率的高低与其体外增殖抑制效果好坏无必然联系。
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