论文部分内容阅读
目的：本实验将糖尿病大鼠背部深Ⅱ。烫伤,模拟糖尿病难愈创面愈合。观察创面愈合时间、对比分析,探讨外用bFGF-胰岛素凝胶缓释剂对糖尿病难愈创面微血管及胶原蛋白Ⅲ表达的影响。方.法：选择SPF级雄性纯系Wistar大鼠,体重(250±40g),2月龄,甘肃省中医学院动物中心提供。第一步快速腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,第二步制备深Ⅱ度烫伤模型。将75只Wistar大鼠(250±40g)随机分为血糖正常大鼠空白缓释凝胶对照A组、糖尿病大鼠空白凝胶对照B组、糖尿病大鼠背部深Ⅱ度烫伤创面应用胰岛素缓释凝胶对照C组、糖尿病大鼠背部深Ⅱ度烫伤创面应用bFGF缓释凝胶D组、糖尿病大鼠背部深Ⅱ度烫伤创面局部应用bFGF胰岛素缓释凝胶E组,每组各15只。分别在各组大鼠烫伤后第3d、7d、11d、15d、21d观察记录创面总面积(残余创面面积),透明膜法计算各组大鼠背部深Ⅱ度烫伤创面愈合率,创面组织甲醛固定后行HE染色检查,观察大鼠背部深Ⅱ度烫伤创面病理视野下愈合情况。创面组织甲醛固定后行rat-CD31/Ⅲ型胶原免疫组化染色检查,检测各组大鼠背部创面组织中CD31、Ⅲ型胶原蛋白Ⅲ的表达情况。ELISA试剂盒检测各组大鼠背部创面中bFGF的含量。检测缓释凝胶制剂的体外释放稳定性情况。结果所制备的bFGF-胰岛素凝胶缓释剂具有适宜的黏附性,良好的保湿性,方便保存及涂抹。检测bFGF-胰岛素凝胶缓释剂,30 d内保持良好稳定性。各组大鼠除糖尿病模型造模注射STZ后死亡3只(已补充造模),正常血糖大鼠组、糖尿病大鼠组均存活至实验完成,创面未发现明显感染迹象。各组大鼠深二度烫伤创面给予干预措施前3d内,肉眼观察无明显变化和差异。观察7、11、15、21 d中,bFGF胰岛素缓释凝胶组大鼠创面愈合效果最佳,B组大鼠愈合率最低,E组愈合率最高。除第3d以外,各组大鼠背部深二度烫伤创面愈合率两两比较,结果差异均具统计学意义(即：P<0.05)。各时间点组织学观察：E组大鼠创面组织中微血管化、肉芽组织生长和胶原纤维生长均优于其余各组。烫伤后随时间延长,各组大鼠创面组织中微血管、胶原蛋白Ⅲ表达逐渐增强,在实施干预措施的第15 d各项指标达高峰,干预的第21 d各项指标表达明显减弱；取各时间点大鼠背部创面组织免疫组织化学染色后观察后发现：CD31染色阳性细胞均于干预后的第3d已表达,随时间延长,各组大鼠背部创面组织中阳性染色细胞数量逐渐增加；从干预后的第15d免疫组化染色阳性细胞数量开始减少；各时间点D、E组cd31染色阳性及胶原蛋白Ⅲ表达数量明显优于其余各组,E组最高,B组大鼠创面组织中各项指标表达最低,各组间结果两两比较,结果差异均具统计学意义(即：P<0.05)。结论1.外用bFGF缓释系统可促进糖尿病大鼠背部深二度烫伤创面愈合。2.外用bFGF-胰岛素凝胶系统可促进创面组织损伤的修复,提高创面愈合率；可促进创面组织中胶原的合成；促进创面组织微血管化,改善创面组织血液微循环有助于肉芽组织形成。