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运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)属于革兰氏阴性细菌,微好氧生长。它对糖的摄取速度和发酵生成乙醇的速度均优于传统酿酒酵母,但其可利用的碳源仅为葡萄糖、果糖和蔗糖。对Z.mobilis CP4进行基因工程改造,使其能代谢木糖生产乙醇,是本中心的一个大课题,本工作是其中一部分,即克隆E.coli K-12talB,并使其在Z.mobilis CP4中表达。首先从E.coli K-12克隆了talB基因,并利用PCR重叠延伸技术将E.coliK-12 talB基因自身的启动子换成Z.mobilis CP4 eno的启动子,得到Peno-talB基因,分别与穿梭载体pZB1连接,得到质粒pZB1-talB、pZB1-Peno-talB。测定了转化子E.coli DH5a(pZB1-talB)和E.coli DH5a(pZB1-Peno-talB)无细胞粗提液中转醛醇酶的酶活。结果表明,两个转化子的酶活水平相当,分别为0.106、0.109U/mg蛋白,均比对照菌株E.coli DH5a(pZB1)的酶活高一倍左右(为0.05U/mg蛋白)。将pZB1-talB和pZB1-Peno-talB分别转化Z.mobilis CP4,并测定了不同培养时间转化子无细胞粗提液中转醛醇酶的酶活。结果如下:Z.mobilis CP4(pZB1-talB)在培养16h、20h和24h时的转醛醇酶酶活分别为0.038、0.054、0.059U/mg蛋白;Z.mobilis CP4(pZB1-Peno-talB)的转醛醇酶酶活分别为0.03、0.038、0.051U/mg蛋白;野生型的Z.mobilis CP4没有检测到转醛醇酶酶活。表明从对数后期到稳定期,talB和Peno-talB在Z.mobilis CP4中的表达水平是逐渐增加的;且talB基因自身启动子能被Z.mobilis CP4很好识别并启动转录。对Z.mobilis CP4(pZB1)、Z.mobilis CP4(pZB1-Peno-talB)的生长情况的初步研究发现,转醛醇酶的表达对其生长有一定的影响。