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目的艾滋病（Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）引起的免疫缺陷性疾病,目前尚无治愈手段,疫苗的研究也始终未有突破,根本原因在于对HIV生物学和人体免疫应答机制及两者之间的相互作用关系等科学问题缺乏本质上的理解和认知,特别是对免疫系统中起关键调控作用的因子作用仍知之甚少。在免疫系统中B7-CD28家族作为重要的共刺激分子家族,在T细胞的激活和行使效应过程中发挥重要调节作用,B7-H1（B7-homolog1）作为新近发现的B7家族共刺激因子,在病毒感染过程中的免疫调节作用备受关注。B7-H1主要表达在活化的树突细胞、巨噬细胞等抗原提呈细胞以及T细胞、非淋巴组织等,B7-H1不与CD28、CTLA-4、ICOS等结合,已经确定的B7-H1配体为PD-1,主要表达在活化的T细胞、NKT细胞、髓系细胞等。B7-H1通过传递负性刺激信号在介导肿瘤免疫逃逸、诱导免疫耐受以及在自身免疫性疾病和细菌、病毒感染等免疫反应中起重要作用。最近研究表明,上调B7-H1及配体的表达成为多种病毒免疫逃逸的重要方式,与慢性病毒感染关系最为密切,且是很有治疗前景的靶位。国外研究显示,B7-H1和配体PD-1抑制途径亦影响机体的抗HIV免疫应答,但其机制尚不明确。Trabattoni等发现HIV感染者T细胞、B细胞、单核细胞B7-H1表达与疾病进展密切相关,有效HAART治疗显著降低病毒血症患者B7-H1的表达水平,还有研究显示,B7-H1/PD-1可抑制HIV病毒特异性T细胞增殖和细胞因子分泌。中国人群的遗传背景不同于国外人群,B7-H1表达水平与HIV感染疾病进展的相关性研究国内外少见报道,尚无对于同一患者B7-H1及其配体同时检测的研究,探讨B7-H1/PD-1抑制途径与效应T细胞功能降低之间的的关系,将为阐明HIV感染效应T细胞免疫耐受的可能机制及临床免疫治疗提供新的思路。1、研究对象36例未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者均来自中国辽宁,其中男性22例,女性14例,年龄分布为19-58岁（39.17±10.64）,所有患者均经Genelab公司蛋白印迹试剂盒确认为HIV抗体阳性。根据HIV感染时间和CD4+T细胞数量将上述患者分为HIV组（CD4+T细胞≥200个/μl,无艾滋病指征性疾病）和AIDS组（CD4+T细胞＜200个/μl或出现艾滋病指征性疾病）。36例HIV/AIDS患者中HIV组21例、AIDS组15例。健康对照组为20例随机抽取的HIV抗体阴性、未暴露于HIV的健康人,性别、年龄均与HIV/AIDS患者匹配,平均年龄为27-52岁（38.1±7.61）,其中男性11名,女性9名。所有研究对象无菌采静脉血5ml（EDTA抗凝）,并在抽血留样前均签署知情同意书并进行了相关问卷调查。2、标本采集用EDTA抗凝负压真空采血管采集研究对象外周静脉血5ml,在6小时内进行试验。3、CD4+T淋巴细胞绝对计数T淋巴细胞绝对值依据1997年美国CDC关于HIV感染者CD4+T细胞检测指导方法,应用BD公司TruCOUNT管、FACSCalibur流式细胞仪MULTISET软件检测。将20μl CD4/CD8/CD3 TRITEST试剂加入绝对计数管中,经反向加样法加入50μl抗凝血,室温避光15min,加入免洗溶血素450μl,室温避光15min,FACSMULTISET软件检测并进行自动分析,计算CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞绝对值及相应比值等。4、密度梯度离心法分离外周血单个核细胞离心管中加入Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液14ml,沿管壁缓慢加入用PBS稀释后的抗凝全血30ml,离心400g,30min。用移液管吸取界面层的PBMC,移入另一离心管中。加入5倍体积的PBS缓冲液,洗细胞2次。5、外周血B7-H1/PD-1表达检测树突细胞表面B7-H1表达水平流式检测:向2支流式管中各加入2×106HIV感染者及健康人PBMC,每管加入下列荧光标记的组合单抗:①Lin1-FITC、CD11c-APC、HLA-DR-PerCP、IgG1 -PE各20μl,②Lin1-FITC、CD11c-APC、HLA-DR-PerCP、B7-H1-PE各20ul,混匀后4℃避光染色30分钟,用PBS洗涤后加入含1%多聚甲醛的PBS重悬,FACSAria流式细胞仪Diva软件进行分析,计算mDC表面B7-H1表达的百分率。mDC的表面特征性标志为CD11chighHLA-DR+Lin 1-。T淋巴细胞B7-H1和PD-1表达水平检测:向3支流式管中各加入1×106HIV感染者及健康人PBMC,每管加入下列荧光标记的组合单抗:①CD3-PerCP、CD4-APC-cy7、CD8-FITC、IgG1-PE各10ul,②CD3-PerCP、CD4-APC-cy7、CD8-FITC、B7-H1-PE各10ul③CD3-PerCP、CD4-APC-cy7、CD8-FITC、PD-1-PE各10ul,混匀后4℃避光染色30分钟,用PBS洗涤后加入含1%多聚甲醛的PBS重悬,FACSAria流式细胞仪Diva软件进行分析。6、病毒载量检测以200μl血浆采用标准版模板制备法提取RNA,采用Roche公司HIV-1Monitor 1.5 commercial kit在COBAS AMPLICOR自动载量仪上以RT-PCR方法测定病毒载量。检测范围为400-750,000copies/ml。HIV-1感染者的病毒载量转化为以10为底的对数用于统计学分析。7、统计分析所有资料采用SPSS11.5软件分析。数据以均值±标准差表示,符合正态分布的数据采用单因素方差分析,并进行均数两两比较,使用Pearson进行相关性分析,不符合正态分布的数据采用Mann-Whitney U test进行比较,使用Spearman rank进行相关性分析,统计概率采用双侧检验,P＜0.05时有统计学意义。实验结果1、HIV/AIDS患者mDC及不同亚群T细胞B7-H1的表达水平通过检测外周血中B7-H1表达发现,和健康对照相比,HIV/AIDS患者mDC、CD4+、CD8+T细胞B7-H1的表达水平显著增高（P值均＜0.05）。其中mDC、CD4+T细胞表面B7-H1的表达在NC、HIV组、AIDS组依次升高,P值均＜0.05,HIV组CD8+T细胞表面B7-H1的表达显著高于NC组,P＜0.05,AIDS组高于HIV组,但无统计学意义。2、HIV/AIDS患者不同亚群T细胞PD-1的表达水平和健康对照相比,HIV/AIDS患者CD4+、CD8+T细胞PD-1的表达水平显著增高（P值均＜0.05）。其中CD8+T细胞表面PD-1的表达在NC、HIV组、AIDS组依次升高,P值均＜0.05,HIV组CD4+T细胞表面PD-1的表达显著高于NC组（P＜0.05）,AIDS组高于HIV组,但无统计学意义。mDC表面不表达PD-1。3、B7-H1/PD-1的表达水平与CD4+T细胞数量的相关性36例HIV/AIDS患者mDC、CD4+T、CD8+T细胞上B7-H1表达的百分率与CD4+T细胞数量呈显著负相关（mDC+B7-H1+:r=-0.647,P＜0.001;CD4+B7-H1+:r=-0.489,P=0.002;CD8+B7-H1+:r=-0.372,P=0.026）。CD4+T、CD8+T细胞上PD-1表达的百分率与CD4+T细胞数量呈显著负相关（CD4+PD-1+:r=-0.374,P=0.025;CD8+PD-1+:r=-0.455,P=0.005）。4、B7-H1/PD-1的表达水平与病毒载量的相关性HIV/AIDS患者mDC、CD4+T、CD8+T细胞上B7-H1表达的百分率与病毒载量呈显著正相关（mDC+B7-H1+:r=0.662,P＜0.001;CD4+B7-H1+:r=0.426,P=0.01;CD8+B7-H1+:r=0.531,P=0.001）。CD4+T、CD8+T细胞上PD-1表达的百分率与病毒载量呈显著正相关（CD4+PD-1+:r=0.362,P=0.03;CD8+PD-1+:r=0.380,P=0.022）。结论1、HIV/AIDS患者不同疾病进程外周血mDC、CD4+、CD8+T细胞B7-H1及其配体表达水平显著升高。2、HIV/AIDS患者B7-H1及其配体表达水平与CD4+T淋巴细胞绝对数明显负相关,与病毒载量明显正相关,是疾病进展的标志。