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背景：TNF-α是一种多极性的细胞因子，有广泛的生物学功能，如引起炎症、诱导细胞增生、分化和凋亡，在机体免疫和抗肿瘤反应中有重要作用。然而，许多肿瘤细胞对TNF-α的细胞毒性作用耐受。因此，了解肿瘤细胞对TNF-α的细胞毒性作用的耐受机制，可能会产生一种新的肿瘤治疗方法。TNF-α对肿瘤细胞的细胞毒性作用受细胞固有的和获得性的因素影响。有研究发现：抑制蛋白质合成能够大大增加TNF-α介导的细胞凋亡，提示可能是合成的蛋白质影响了肿瘤细胞对TNF-α的敏感性。但目前对其靶细胞蛋白合成调控机制了解甚少。 目的：本研究采用培养SMMC-7721细胞，观察IL-6对TNF-α的细胞毒性作用的影响；阻断NF-κB活化通路对TNF-α的细胞杀伤作用和细胞周期的影响；并探讨TNF-α激活NF-κB对IL-6表达的影响。希望能更确切地阐明IL-6在肿瘤治疗中的可能作用和NF-κB信号通路在SMMC-7721细胞对TNF-α耐受中的作用。 方法：1．用RT-PCR和RIA分别检测SMMC-7721细胞在TNF-α作用下IL-6 mRNA表达和IL-6分泌。同时应用MTT实验、流式细胞仪检测TNF-α诱导的细胞生长和凋亡的影响，并观察IL-6或阻断IL-6活性对细胞生长和凋亡的影响。 二用 ELISA检测 TNF－Q对 NF－K B的活化作用；免疫组化检测 p65亚基的转核。同时观察 NF－K B信号通路活化对 SMMC刁72细胞凋亡和细胞周期的影响及加入活化阻断剂 TPCK后，对 IL－6mRNA表达、IL－6分泌、凋亡和细胞周期的影响。 结果：l．未刺激的 SMMC－772细胞可以少量表达 IL－6，加入＊＊＊－。后能明显地诱导1＊－6的表达增加：随刺激时间的延长表达呈持续性增加，8小时达到高峰，12小时至 24小时稍有降低，此后 IL－6表达一直维持在较高水平。SMMC－772 细胞表达 IL－6的量随 TNF一口浓度的增加而增加。正常培养状态下 SMMC－772细胞IL－6mRNA表达微弱；TNF－u刺激后能明显地诱导IL－6mRNA的表达，至 6小时达到高峰，8 ／J’时 IL－6mRNA表达略有下降，然后一直维持较高的水平。 2．外源加入的 IL－6对 SMMC－772细胞生长起促进作用。加j＼抗几一6、抗IL－6R抗体时，SNIMC－7721细胞存活率明显降低。SMMC－772细胞对 TNF一口的敏感性也显著增加。IL－6、抗几一6、抗 IL6R对 TNF。口诱导 SMMC－772细胞凋亡没有显著影响。 3．ELISA检测表明：10ng／mlTNF一口刺激SMMC－7721 细胞3Om…，NF－。P g4发牛界著的转认活朴（P＜O05＼三八活化达十l。、，。｛，然则引蛇口；合，hi；已处5 1；L人、十比拟付他村。V NP。B j；。；一化随TNF－。的剂量增加而增加。NF－。B亚基p65 ＆疫细胞化学显示：正常培养条件下，胞浆中呈强阳性染色；TNF．口刺激能诱导p65亚基转核，在30分钟时即可观察到p65亚基明显的核转位，胞核、胞浆中均有阳性染色；l小时细胞核中染色呈强阳性，二小时核中染色达到高峰，胞浆染色已变得微弱。p65亚基的核转位也呈TNF a剂量依赖关系。 4．应用20卜mol／L TPCK预处理SMMC－7721细胞30min，力入 10ng／mL TNF－a，分别检测核提取物的p65亚基含量、IL巧和细胞存活率。与对照组比，p65亚基含量、IL革和细胞存活率显著 Vlll降低。 5．单独用TNF－a处理细胞，细胞对TNF一日诱导的凋亡表现出抵抗。单独使用 TPCK时，SMMC－772细胞的凋亡并没有明显改变，将SMMC－772细胞先用TPCK（20卜mol几）预处理30min，再加入TNF一日共培养刺激至48h，能显著增强TNF－a诱导细胞凋亡的作用。 6．在无血清条件下培养 24小时，加入含 5％小牛血清后，继续培养12小时，正常培养的SMMC－7721细胞很快由GO／GI期进入 S期。10ng／ml TNF一口处理 SMMCJ 细胞，导致细胞加速从GO／GI 期进入S 期。与对照组比较，单独使用TPCK，SMMC－772 细胞的周期分布并没有明显改变，但将 SMMC－772细胞先用TPCK（20pmol儿）须处理30min，再加入TNF一日共培养刺激至 12h，SMMC－7721细胞周期明显被阻滞在 GO／GI期。 结论：1．TNF－。能诱导 SMMC－772细胞 NF－K B活化，NF－K B 活化能启动 SMMC．772 细胞分泌 IL－6。外源性和内源性的IL－6对 SMMC－772细胞起促进生长作用。阻断内源性 IL－6活性可增强细胞对TNF－u细胞毒作用的敏感性，但对TNF一口诱导的细胞凋亡没有显著影响。IL－6作为 SMMC－772细胞的促生长因子，可能是 SMMC刁72细胞对 TNF一口表现出耐受性的原因之一。 2．N卜KB活化发挥了抗凋亡和促进细胞周期转换作用，增强了 SMMC，772细胞对 TNF一口的耐受性。提示抑制 NF－。B活化可能成为治疗肿瘤的一条可能途径。