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酚氧化酶原激活蛋白酶(PAPs)是酚氧化酶原激活过程中的一个关键酶。外界的免疫刺激能够诱导级联反应上游的蛋白对PAP的前体进行剪切激活,而激活后的PAP能够将无活性的酚氧化酶原剪切激活为有活性的酚氧化酶并最终生成细胞毒素物质来消灭外源物。本文克隆了两个小菜蛾PAP基因,并对其功能进行了初步研究。现将研究结果总结如下：1)采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了2条cDNA的全长序列,所克隆的2条全长cDNA序列命名为Px-PAP1和Px-PAP3b,长度分别为1595及1650bp,开放阅读框长度分别为1149与1323bp。序列分析结果表明,Px-PAP1和Px-PAP3b均含有信号肽序列,羧基末端都包含完整的催化三联体,Px-PAP1在氨基末端含有一个发夹结构域,然而Px-PAP3b在氨基末端含有两个发夹结构域。多序列比对结果表明,Px-PAP1和Px-PAP3b编码的氨基酸序列和其它鳞翅目昆虫的PAP存在较高相似性。进化树分析结果表明,Px-PAP1与Px-PAP3b分别能与其它昆虫的PAP1与PAP3聚类,同源关系较近。2)明确了大肠杆菌诱导后酚氧化酶原激活酶基因的转录规律。在小菜蛾幼虫体内注入已灭活的大肠杆菌进行免疫诱导,并于注射后0、2、4、8、12及24h取样,提取血细胞的RNA,进行rt-qPCR检测。结果显示,经大肠杆菌免疫诱导后,Px-PAP1、x－PAP3a和Px-PAP3b三个基因的表达量都会显著升高,大肠杆菌诱导后0-4h,Px-PAP1及Px-PAP3a的转录水平逐渐升高,并且两个基因都于诱导后4h达到峰值,而后4-24小时内,这两个基因的表达量逐渐回落。而Px-PAP3b基因的转录水平在大肠杆菌诱导后0-8h都逐渐升高,并于诱导后8h达到峰值,而后8-24小时内,此基因的表达量逐渐回落。在大肠杆菌诱导后,Px-PAP3b的表达量显著高于Px-PAP1和Px-PAP3a。3)明确了CvBV对酚氧化酶原激活酶基因的转录激活有抑制作用。将E. coli+CvBV(0.05VREs)注射到4龄初期小菜蛾幼虫体内,以仅注射E.coli为对照,于注射后4、8h进行取样,提取血细胞的RNA,进行rt-qPCR检测。结果显示,在注射后4h和8h后,Px-PAP1、Px-PAP3a和Px-PAP3b三个基因相对于仅注射E.coli的对照组而言,其表达量都被下调。4)进行了小菜蛾酚氧化酶原激活酶基因的RNA干扰实验。在小菜蛾幼虫体内注入E. coli+700ng dsPAP,以注射E. coli+700ng dsGFP为对照。处理组与对照组都于注射后6、12及24h后进行取样,采用rt-qPCR的方法对RNA干扰的效果进行检测。结果表明,在针对Px-PAP1基因的干扰试验中,发现12h后Px-PAP1基因表达没有受到抑制,而与其同源的Px-PAP3a基因的表达却成功地被抑制；在针对Px-PAP3a基因的干扰试验中,发现12h后Px-PAP1与Px-PAP3a基因表达同时被抑制；在针对Px-PAP3b基因的干扰试验中,6h后未检测到干扰效果,12h及24h后才检测到明显的干扰效果,且随着时间的推移干扰效果逐渐下降,此时Px-PAP1与Px-PAP3a基因都未检测到干扰效果。