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目的:研究由麦冬、半夏、白头翁、蒲公英、川芎和白花蛇舌草六味中药组成的中药复方制剂对体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞的增殖与凋亡的影响,并探讨其作用机制,为开发皮肤鳞癌药物治疗提供理论依据。方法:(1) MTT比色法测定中药复方制剂对A431细胞株增殖活性的影响;(2)光镜观察细胞形态学的改变;(3)光化学法测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放;(4) Hochest33258细胞核荧光染色法检测中药复方制剂对A431细胞凋亡的影响;(5)比色法测定Caspase-3和Caspase-9活性;(6)酶联免疫吸附测定法(elisa)检测细胞色素C含量;(7)免疫细胞化学法测定Bax蛋白和Bcl-2蛋白的表达;(8)流式细胞仪检测中药复方制剂作用于A431细胞株后细胞周期的分布及凋亡率的变化。结果:(1)MTT法显示,随着中药复方制剂作用时间延长及剂量增加,其对A431细胞增殖的抑制作用增强,有明显的时间和剂量依赖性,与对照组比较差异有显著性(P <0.01);(2)光镜显示中药复方制剂能够引起细胞形态的改变。(3)LDH结果显示:高、中、低剂量组中药复方制剂LDH值较阴性对照组增高(P<0.05;P<0.01);(4)Hochest33258染色结果显示,不同浓度剂量组作用细胞48h后,细胞核均出现不同程度蓝色荧光,可见核固缩、凋亡小体等典型的凋亡形态学特征;(5)Caspase活力检测结果显示:Caspase-3、Caspase-9活力表达增加,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05;P<0.01);(6)细胞色素C检测结果显示:不同浓度剂量组细胞色素C含量较阴性对照组增高(P<0.01);(7)免疫细胞化学法结果显示:与阴性对照组比较,中药复方制剂组Bax表达增加,Bcl-2表达减少,差异具有统计学意义(P<0.01)(8)流式细胞仪检测:中药复方高、中、低剂量组细胞凋亡率较阴性对照组增加,其中高、中剂量组与阴性对照组比较有显著差异(P<0.05);中药复方制剂高、中、低剂量组G0/G1期细胞较阴性对照组增多,S期、G2/M期细胞减少,其中中药复方制剂高剂量组G0/G1期较阴性对照组增高,S期较阴性对照组降低,具有显著性差异(P<0.05)。结论:(1)不同浓度的中药复方制剂有抑制皮肤鳞癌A431细胞增殖的作用,且呈一定的时间和剂量依赖关系;(2)其可能的作用机制为:①破坏细胞膜;②增加细胞凋亡率,影响细胞周期进程;③增加细胞色素C的表达,提高凋亡通路中Caspase-3、Caspase-9活力;促进凋亡蛋白Bax的表达,降低Bcl-2的表达,干扰线粒体凋亡信号转导途径,从而促进A431细胞的凋亡。