【摘 要】
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甲型流感病毒对人类和禽类的威胁旷日持久,严重影响着人类健康和养殖业的发展。本研究所涉及的FI6抗体来源于人的浆细胞,是前人通过单细胞培养法从志愿者的外周血浆细胞中分离出一种单克隆抗体,能够识别并结合H1-H16所有血清型亚型的病毒。本研究将FI6的VL段和VH段通过短肽相连得到其Fv段,随后使用铰链(Hinge)与鸡IgY和人IgG的Fc段相连,得到两条抗体,分别为鸡源性抗体(FI6C)和人源性抗
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甲型流感病毒对人类和禽类的威胁旷日持久,严重影响着人类健康和养殖业的发展。本研究所涉及的FI6抗体来源于人的浆细胞,是前人通过单细胞培养法从志愿者的外周血浆细胞中分离出一种单克隆抗体,能够识别并结合H1-H16所有血清型亚型的病毒。本研究将FI6的VL段和VH段通过短肽相连得到其Fv段,随后使用铰链(Hinge)与鸡IgY和人IgG的Fc段相连,得到两条抗体,分别为鸡源性抗体(FI6C)和人源性抗体(FI6H)。将氨基酸序列进行密码子优化后加入Kozak序列以期提高其翻译起始效率;添加终止密码子TAA以提高蛋白翻译终止效率;删除基因内部常用酶切位点,在两端加入BamH I、EcoR I和Xba I、PstI酶切位点以便进行基因克隆操作。利用酶切连接的方法将目的片段连接至pVL1393转移载体,随后通过转移载体与失活拯救型穿梭质粒共转染家蚕细胞将目的片段重组入杆状病毒中。随后感染五龄家蚕,收集蚕血淋巴,通过PCR鉴定,Western blot等方法鉴定其在家蚕中表达。随后进行体外实验来检测所设计的重组抗体的生物学活性,血凝抑制实验显示FI6H和FI6C具有一定的血凝抑制效果,两者均为1:160,与血凝素结合的能力相当。而在鸡成纤维细胞上进行的病毒中和实验显示FI6H对细胞的保护作用要比FI6C 好,FI6H 组 PD50 为 104+23/mL 蚕血淋巴;FI6C 组 PD50 为 10-2.79/mL蚕血淋巴。结果显示本研究成功利用家蚕-杆状病毒表达系统来表达所设计的两条重组单链甲型流感病毒中和抗体,对其进行的生物学活性检测表明其具有良好的生物学活性。为对抗甲型流感病毒的广谱抗体的规模化生产奠定了基础,同时也为广谱疫苗的研发提供了思路。
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