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目的探究开心散对体内外抑郁模型脂质代谢的影响,阐明开心散调节脂质代谢紊乱发挥抗抑郁作用的关键靶点及分子机制,为之后学者对开心散的抗抑郁作用机制研究提供科研实验基础。方法1体内实验是建立慢性不可预计温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)大鼠模型,分别在造模前,造模4周后,给药3周后三个时间点对对照组、模型组、开心散组、氟西汀组大鼠进行称体重、行为学评价(旷场实验、糖水偏嗜度实验、强迫游泳实验),分析CUMS大鼠是否造模成功以及开心散对CUMS大鼠的治疗效果。2采用PT-PCR技术检测开心散干预前后CUMS大鼠海马内的20个脂质蛋白相关基因(MMP2、MMP9、APOE、APOA1、APOB、APOD、APOC1、CLU、COL1A2、KDR、HSPB1、HSPA5、KNG1、VIM、PRG2、PLTP、PON1、SERPINA1、VCAM1、APP)的mRNA的表达水平;采用Western Bolt技术检测开心散干预前后CUMS大鼠海马内的上述20个基因的蛋白的表达水平,分析开心散对CUMS大鼠海马内脂质代谢紊乱的影响。3体外构建皮质酮损伤SH-Sy5y细胞模型,采用CCK-8试剂盒检测对照组、模型组、开心散组的SH-Sy5y细胞的活力,观察开心散对皮质酮损伤SH-Sy5y细胞活力的影响。4采用PT-PCR技术检测开心散干预前后皮质酮损伤SH-Sy5y细胞内的上述20个脂质代谢相关基因的mRNA的表达水平,在细胞水平进一步验证开心散调节脂质代谢紊乱发挥抗抑郁作用的潜在靶点。5使用Uniprot数据库网站和DAVID数据分析软件,将上述20个基因与已知的抑郁症涉及机制相关联,采用String通路数据库分析蛋白质之间可能的相互关系以及这些蛋白质可能参与的信号通路,运用Cytoscape数据分析软件构建蛋白互作网络,分析开心散调节脂质代谢紊乱发挥抗抑郁作用的关键靶点。6采用PT-PCR技术筛选出APOE siRNA转染SH-Sy5y细胞的最佳序列,进一步采用PT-PCR技术检测开心散干预前后APOE siRNA转染的SH-Sy5y细胞中,5种炎症因子(IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、COX-2)mRNA的表达,预测开心散调节脂质代谢紊乱发挥抗抑郁作用的潜在机制。结果1 CUMS大鼠建模4周后,对照组的大鼠的体重、糖水偏嗜度、运动总路程均明显高于其他三组,而强迫游泳不动时间显著低于其他三组,证明CUMS大鼠造模成功;开心散给药3周后,开心散组和氟西汀组的大鼠的体重和行为学评分趋近于正常水平,证明开心散具有抗抑郁作用。2 PT-PCR检测CUMS大鼠在开心散给药前后海马内上述20个基因mRNA的表达水平,发现经开心散治疗后,MMP2、APOC1 mRNA表达显著降低,MMP9、APOB、APOD、APOE、PON1、PLTP mRNA表达显著升高。Western Blot检测上述7种mRNA表达显著改变的基因的蛋白的表达水平,发现经开心散治疗后,MMP2蛋白表达显著降低,APOE、PON1、PLTP mRNA表达显著升高。3采用CCK-8试剂盒检测皮质酮损伤SH-Sy5y细胞活力,发现用1mmol/L的皮质酮对SH-Sy5y细胞给药24h后,细胞活力最低,而经500μg/mL开心散干预后SH-Sy5y细胞活力恢复。4 PT-PCR检测皮质酮损伤SH-Sy5y细胞在开心散给药前后上述20个基因mRNA的表达水平,发现经开心散治疗后,MMP2、APOC1、HSPB1 mRNA表达显著降低,APOB、APOD、APOE、HSPA5、PLTP、VIM mRNA表达显著升高。综合体内外CUMS大鼠和皮质酮损伤SH-Sy5y细胞内20个基因的mRNA和蛋白表达结果,提示MMP2、APOE、PLTP可能是开心散调节脂质代谢发挥抗抑郁作用的潜在靶点。5对蛋白网络图分析,发现APOE不仅与20种蛋白中的APOB、APOC、CALR、HSP90B1、APP、KNG1、CLU、SERPINA1、PON1、APOA、ABCA1之间存在相互作用,而且与炎症因子IL-6的表达有关,而IL-6的表达与IL-2、IL-1β等炎症因子的表达相关。6采用PT-PCR检测APOE siRNA1转染的SH-Sy5y细胞内5种炎症因子(IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、COX-2)的mRNA的表达,发现IL-2、IL-6、TNF-α的mRNA的表达在开心散给药前后发生明显变化,提示SH-Sy5y细胞中APOE mRNA的表达与IL-2、IL-6、TNF-αmRNA的表达有直接关系,开心散可能是通过增加脑内APOE mRNA的表达,进而上调炎症因子IL-2、IL-6、TNF-αmRNA的表达发挥抗抑郁作用的。结论1开心散可通过调节脂质代谢紊乱发挥抗抑郁作用,MMP2、APOE、PLTP可能是开心散调节脂质代谢发挥抗抑郁作用的潜在靶点。2 APOE的mRNA表达与IL-2、IL-6、TNF-αmRNA的表达密切相关,开心散可能通过增加脑内APOE的mRNA表达,进而上调炎症因子IL-2、IL-6、TNF-αmRNA的表达发挥抗抑郁作用。