【摘 要】
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目的:本文的研究目的是建立一种新型的肿瘤光热/免疫联合治疗。利用水热碳化法与金属多酚配位作用构建锰配位多酚碳量子点（MP-CDs）,用于介导局部光热消融杀伤肿瘤细胞;同时,激活c GAS-STING信号通路促进树突状细胞（DC）的成熟,诱发机体产生持久的抗肿瘤免疫反应。方法:1.采用两步法制备MP-CDs。首先采用没食子酸和甘氨酸为前体物,通过微波辅助水热法制备多酚碳量子点（P-CDs）;随后通过
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目的:本文的研究目的是建立一种新型的肿瘤光热/免疫联合治疗。利用水热碳化法与金属多酚配位作用构建锰配位多酚碳量子点（MP-CDs）,用于介导局部光热消融杀伤肿瘤细胞;同时,激活c GAS-STING信号通路促进树突状细胞（DC）的成熟,诱发机体产生持久的抗肿瘤免疫反应。方法:1.采用两步法制备MP-CDs。首先采用没食子酸和甘氨酸为前体物,通过微波辅助水热法制备多酚碳量子点（P-CDs）;随后通过金属多酚配位作用装载锰离子,制备MPCDs。2.表征MP-CDs的理化性质。采用高分辨率透射电子显微镜（HRTEM）表征MP-CDs的物理特征;采用傅里叶变换红外光谱仪（FTIR）和X射线光电子能谱仪（XPS）检测分析MP-CDs的功能基团和化学结构组成;采用紫外-可见分光光谱（UV-Vis）和荧光光谱（PL）表征MP-CDs的光学特征。3.表征MP-CDs的光热性能。采用808 nm近红外光（NIR）激光器与手持式近红外成像仪表征MP-CDs水溶液的光热性能与光稳定性,最后通过理论计算MP-CDs的光热转换效率。4.表征MP-CDs的生物相容性。采用比色法测定MP-CDs的血液相容性及溶血率。采用cck-8实验检测MP-CDs细胞相容性。5.体外表征MP-CDs介导光热杀伤肿瘤细胞的性能。将一定浓度的MP-CDs与三阴性乳腺癌细胞4T1细胞共孵育,在808 nm近红外光的照射下计算细胞相对活力,探究MPCDs对体外4T1细胞的光热杀伤效果。6.表征MP-CDs对DC细胞成熟的影响。采用流式细胞仪分析DC细胞表面CD80和CD86的表达情况,探索MP-CDs诱导DC细胞成熟的效果。结果:1.成功制备了锰配位多酚碳量子点MP-CDs。2.制备的MP-CDs为类球形,粒径极小且分布较均匀。主要由碳、氮、氧和锰元素组成,其表面含有丰富的羧基和羰基,使其具有良好的水分散性及较宽的光致发光荧光光谱和激发波长依赖的发射光谱。3.经功率密度为1.5 W/cm2,波长为808 nm的近红外光照射下,浓度为0.25-2 mg/m L的MP-CDs溶液的温度在6 min即可达到33.3-58.5℃,表明MP-CDs的浓度越高其光热升温越好;同时,反复照射也不影响其光热性能,表明MP-CDs具有良好的光热稳定性;MP-CDs在同一浓度下,照射的近红外光功率密度越高,光热升温越快。另外,配位的锰离子会削弱碳点的光热转换效率,但影响较小。4.紫外可见光谱显示不同浓度的MP-CDs（5-400μg/m L）在541 nm处的溶血率分别为0.03%,0.91%,2.3%,2.9%,3.7%,5.0%,说明MP-CDs具有良好的血液相容性。不同浓度的MP-CDs（50、100、200、400、600和800μg/m L）对正常细胞（MEF）和乳腺癌细胞（4T1）的细胞活性影响作用小。即使MP-CDs浓度高达800μg/m L时,两种细胞活性依旧大于80%,说明MP-CDs具有良好的细胞相容性。5.体外光热消融结果显示,在（功率密度2.0 W/cm2,波长808 nm）近红外激光的照射下,随着MP-CDs浓度的逐渐增加,4T1细胞活力逐渐减弱。当MP-CDs浓度达800μg/m L时,4T1细胞活力仅剩17.5%,表明MP-CDs具有良好的光热杀伤力。6.流式细胞分析结果发现,随着MP-CDs浓度的增加,DC细胞表面CD80和CD86的表达增加。其中,400μg/m L的MP-CDs（1:100）和MP-CDs（1:10）可使DC细胞表面CD80和CD86的表达分别达到11.4%和17.6%。结果表明,MP-CDs具有一定的诱导DC细胞成熟的作用,并且Mn越多诱导DC细胞成熟的效果越好。结论:1.本研究成功将锰元素引入碳量子点合成了MP-CDs。2.MP-CDs的尺寸极小,拥有优异的水分散性,良好的荧光性能、光热转换性能和生物相容性等优点。3.MP-CDs能够有效地将近红外光能转化为热能,用于介导肿瘤的光热治疗;同时该碳点上的锰能诱发DC细胞的成熟,触发先天免疫,达到肿瘤的光热和免疫联合治疗。
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