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第一部分基因芯片筛查前列腺癌细胞系抗甲基化干预后的目标基因目的:研究前列腺癌发生过程中可能受甲基化调节的基因。方法:用甲基化抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶处理前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3后,采用人类全基因表达谱芯片筛选处理过和未处理的细胞,找出可能在去甲基化干预后导致恢复表达的基因。结果:在用5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶处理后,PC-3细胞系中DMBT1(Deleted in MalignantBrain Tumor)基因表达显著上调,而在LNCaP细胞系中未见到DMBT1基因的显著改变。结论:DMBT1在经甲基化抑制剂作用后的PC-3细胞系中表达上调,提示其表达可能和DNA甲基化有关,需进一步研究其在前列腺癌组织中的表达情况。第二部分DMBT1在前列腺癌细胞系和组织中的表达及其临床意义目的:检测DMBT1在前列腺癌细胞系和组织中的表达,并分析其表达水平与临床病理特征如年龄、PSA、临床分期、骨转移、肿瘤分化程度的关系。方法:通过实时荧光定量PCR检测DMBT1基因在前列腺癌细胞系LNCaP、PC-3及39例前列腺癌和16例前列腺正常组织中mRNA的表达情况。Western blot检测以上标本DMBT1蛋白的表达水平。使用统计软件SPSS 13.0采用Spearman相关分析DMBT1基因的表达水平与临床病理特征的关系。结果:DMBT1基因在PC-3及LNCaP细胞系中相对于正常组织表达均下调且LNCaP细胞系中表达下调程度更为显著。另外在经甲基化抑制剂作用后的PC-3细胞系DMBT1基因恢复表达的程度要明显高于LNCaP细胞系,这与基因芯片的结果相类似。相对于正常组织,本实验中100%的前列腺癌患者组织中DMBT1 mRNA及蛋白表达均显著下调。统计分析表明,DMBT1的表达水平与cTNM分期及骨转移有关,而与年龄、PSA水平及肿瘤分化程度无显著关系。结论:实时荧光定量PCR较传统的RT-PCR可更好的反应出基因mRNA的表达水平。DMBT1有可能作为一个有用的鉴别雄激素依赖和雄激素非依赖性前列腺癌并判断预后的分子标志物。但需要更进一步的研究去阐明DMBT1的调控机制以及DMBT1在细胞生理和肿瘤发生中的作用。