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第一部分、张唐法针灸临证学术思想浅析湖北名中医张唐法主任医师治学严谨,勤求古训,学贯中西,具有丰富的针灸临证经验和独特的学术思想。其在针法上擅长捻转无痛进针;强调疏穴简针,气至病所;注重治神、得气与守气;临证主张辨证、辨病、辨经结合,针灸、针药并用;崇尚临床研究型道路,力推中西医结合为发展针灸学的重要途径。第二部分、夹脊电针对腰椎间盘退变的保护作用及其机制研究目的:研究夹脊电针治疗腰椎间盘突出症(LDH)的临床疗效,并在首先证实夹脊电针对模型兔退变腰椎间盘MRI、细胞外基质(ECM)表达影响的证据基础上,进一步研究夹脊电针调控腰椎间盘细胞凋亡,继而影响椎间盘基质调节因子的表达,纠正基质降解和合成代谢之间的失衡,延缓椎间盘退变,促进椎间盘修复与再生的作用及机制。方法:选取我科符合纳入标准的29例LDH患者,每天给予电针治疗1次,连续6次为1疗程,间隔1天后再进行下一个疗程,共治疗2个疗程。治疗前后通过改良版本的Oswestry功能障碍指数问卷表对患者进行综合评估,治疗结束后通过改良版的Macnab疗效评定标准评估患者的临床疗效。另外,选用36只清洁级成年新西兰大白兔随机分为正常组、假模型组、模型组和夹脊电针组(治疗组),每组9只。参照Kroeber M等的造模方法,采用克式针横穿椎体后椎体间加压建立腰椎间盘退变模型。模型组于造模成功(椎体间加压28d)后,继续行椎体间加压28d,不作任何治疗;治疗组于造模成功后第1天开始行L4、L5夹脊电针治疗,连续治疗6d为1疗程,疗程间隔1d,共治疗4个疗程,治疗周期28d;假模型组同模型组,但不进行椎体间加压,不做任何治疗;正常组自然饲养,不作任何治疗。各组分别在第1d、28d和56d三个时间点各取3只,行L4-5椎间盘MRI平扫之后处死,取出椎间盘组织,从正中矢状位将其分成两部分,一部分供免疫荧光检测,包括:ECM(COL-1、COL-2)、ECM调节因子(MMP-13、TIMP-1、BMP-2);另一部分供Western Blot检测,包括ECM(biglycan、decorin)、ECM调节因子(MMP-13、BMP-2)、凋亡相关基因(Bcl-2、Bax)。结果:1.夹脊电针治疗LDH的临床疗效经过2周治疗后,患者Oswestry功能障碍总评分较治疗前有所下降,差异具有统计学意义(均P<0.05);总有效率为89.66%。2.夹脊电针对退变椎间盘MRI分级指数的影响正常组椎间盘表现为均匀明亮的高信号,所示椎间盘与邻近节段的椎间盘信号无明显差异。造模成功后的实验兔相应腰椎间盘出现退变征象,其T2加权像呈低强度信号改变,较邻近的上、下位椎间盘减低,椎间隙变窄,椎间盘变薄后突,部分可见腰椎不稳畸形。依据Pfirrmann’s MRI分级指数评估椎间盘退变的程度,正常组和假模型组在第28d与第56d T2加权信号均保持稳定,分级指数为Ⅰ级;模型组和治疗组第28d为IV级,模型组第56d信号降至最低,为IV-V级;治疗组第56d为III-IV级,与该组第28d及模型组第28d、56d相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。3.夹脊电针对退变椎间盘ECM的影响免疫荧光检测COL-1和COL-2显示,模型组第28d、56d平均光密度显著下降,与正常组和假模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组第56d平均光密度明显增加,与该组第28d和模型组第28d、56d相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测biglycan和decorin显示,正常组和假模型组各时间点表达均无显著性变化;模型组第28d、56d表达均明显减少,与正常组和假模型组相比,差异均有统计学意义(biglycan,P<0.01;decorin,P<0.05)。治疗组第56d表达明显增加,与该组第28d和模型组第28d、56d相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。4.夹脊电针对退变椎间盘ECM调节因子的影响正常组和假模型组各时间点之间MMP-13免疫荧光平均光密度和MMP-13/GAPDH平均值差异无统计学意义;模型组第28d、第56d MMP-13表达均明显增强,与正常组和假模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组第56d MMP-13表达下调,与该组第28d和模型组第28d、56d相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物显微镜下发现TIMP-1在荧光激发下,胞浆清晰可见红色荧光,其中各组第1d和正常组、假模型组的第28d、56d时间点均呈现强阳性,模型组第56d时间点阳性细胞最少、红色荧光最弱(P<0.01),而治疗组在第56d时间点则有所升高。第28d,模型组和治疗组的BMP-2免疫荧光平均光密度和BMP-2/GAPDH平均值均较假模型组显著下降(P<0.01);第56d,治疗组BMP-2免疫荧光平均光密度和BMP-2/GAPDH平均值较第28d时间点明显升高,且较模型组第56d明显升高(P<0.05)。5.夹脊电针对退变椎间盘凋亡调控基因表达的影响各组第28d实验兔椎间盘组织中,模型组和治疗组分别与假模型组Bcl-2/GAPDH、Bax/GAPDH比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结合模型组和治疗组第28d MRI退变征象,说明在模型兔退变腰椎间盘组织中,Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增多。各组第56d实验兔椎间盘组织中,治疗组与模型组Bcl-2/GAPDH、Bax/GAPDH比较,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,说明夹脊电针能上调模型兔退变腰椎间盘组织中Bcl-2蛋白表达水平,下调模型兔退变腰椎间盘组织中Bax-2蛋白表达水平。结论:1.夹脊电针能有效改善LDH患者的症状,降低腰腿疼痛对日常生活和工作的影响。2.对新西兰大白兔进行轴向椎间施压28d,MRI检查显示模型兔腰椎间盘出现典型的退变征象,可制作较理想腰椎间盘退变动物模型。且该造模方案可操作性较强,可重复性较高,造模成功率较高。夹脊电针可改善退变腰椎间盘Pfirrmann’s MRI分级指数。3.夹脊电针可上调ECM表达,如COL-1、COL-2、biglycan、decorin等。4.夹脊电针可影响ECM调节因子的表达,如下调基质分解代谢酶和退变标志物MMP-13;上调抗分解代谢酶TIMP-1和合成代谢酶BMP-2,进而纠正基质降解和合成代谢之间的失衡。5.Bcl-2、Bax蛋白参与了实验兔腰椎间盘退变的进程。模型兔退变腰椎间盘组织中Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白表达增多。夹脊电针可能通过上调模型兔退变腰椎间盘组织中Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达,使细胞凋亡的敏感性降低、抗凋亡能力增强,引起细胞凋亡减少,从而对模型兔腰椎间盘退变发挥调控作用。6.夹脊电针通过上调模型兔退变腰椎间盘组织中Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达,使细胞凋亡的敏感性降低、抗凋亡能力增强,引起细胞凋亡减少,继而影响椎间盘基质调节因子的表达,纠正基质降解和合成代谢之间的失衡,促进基质成分增加,可能是夹脊电针延缓椎间盘退变,促进椎间盘修复与再生,发挥保护作用的重要机制。