心血管疾病是全球的头号死因:每年死于心血管疾病的人数多于任何其它死因。据世界卫生组织统计,2016年,估计有1790万人死于心血管疾病,占全球死亡总数的31%。其中,85%死于心脏病和中风。四分之三以上的心血管疾病死亡发生在低收入和中等收入国家。非传染性疾病导致的1700万七十岁以下死亡中,有82%发生在低收入和中等收入国家,37%由心血管疾病造成。血管钙化,即在动脉壁沉积磷酸钙,病理生理过程常常表现为血管壁僵硬,血管壁的弹性降低,极容易发生血栓,血管破裂,引起脑出血,脑梗死心肌梗死等心血管疾病,是心血管疾病高发率和高死亡率的重要因素。影响了约60%的60岁以上和80%的80岁以上人群,曾被认为是不受调控的终末期退行性病变。随着研究的深入,发现血管钙化是一个主动调控的过程,在动脉粥样硬化发展过程中处于动态变化。既可以表现为稳定的斑块,也是为炎症活跃的标志。临床上血管钙化是心脑血管疾病致死致残的重要预测因子,不仅发病率高,而且治疗上存在巨大挑战,尤其是介入治疗的难题,往往被排除在临床研究之外。因此,对血管钙化从基础到临床的一系列研究,具有重要的理论及实践意义。lnc RNA起初被认为是基因组转录的“噪音”,是RNA聚合酶II转录的副产物,不具有生物学功能。然而,有文献研究表明,lnc RNA参与了X染色体沉默、基因组印记以及染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多种重要的调控过程。lnc RNA的这些调控作用也开始引起人们广泛的关注。lnc RNA morrbid最初于2016年由美国科学院院士在《自然》杂志上发表。中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和“经典”单核细胞加起来约占人体白细胞总数的70%,是人体中寿命最短的细胞。但是它们的反应能力有时确能够非常强烈,甚至会损害周围的健康组织。研究表明Lnc RNA Morrbid通过调调节Bcl2l11的转录,促进PRC2复合物在邻近的Bcl2l11凋亡基因启动子中的积累,从而控制中性粒细胞等炎症细胞的生命。目前有关lnc RNA morrbid的文章,尚只有6篇,主要集中在免疫方面。并且尚无研究阐明lnc RNA morrbid与钙化的关系。钙化作为心血管疾病的重要危险因素及恶化条件,亟需更进一步的研究。目的:本课题探讨Lnc RNA Morrbid在血管钙化中的作用方法:1.探讨钙化模型的建立(1)movas细胞处理不同时间和钙化条件,茜素红染色检测钙化程度。(2)小鼠原代平滑肌细胞钙化处理,茜素红染色,钙离子定量,q PCR实验检测钙化程度。(3)C57小鼠药物处理建立活体小鼠钙化模型,茜素红染色,钙离子定量,q PCR实验检测钙化程度。(4)人体腹主动脉组织样本茜素红染色,检测钙化程度。2.Lnc RNA Morrbid在钙化中的表达(1)小鼠原代平滑肌细胞和C57小鼠组织样本检测Lnc RNA Morrbid的表达(2)人体腹主动脉组织样本q PCR检测Lnc RNA Morrbid的表达3.下调Lnc RNA Morrbid后对钙化的影响(1)采用不同si RNA,检测其敲低效率。选取效率最佳的si RNA进行敲低实验。(2)钙化处理小鼠原代平滑肌细胞,观察沉默Lnc RNA Morrbid对钙化的影响。4.Lnc RNA Morrbid的作用机制(1)RNA-seq寻找Lnc RNA Morrbid可能参与的调控通路及下游。(2)FISH实验定位Lnc RNA Morrbid的分布。结果:1.成功建立movas,小鼠原代平滑肌细胞,C57活体小鼠钙化模型,人体腹主动脉瘤组织样本钙化明显。2.Lnc RNA Morrbid在钙化模型及人体组织样本中表达上升。3.抑制Lnc RNA Morrbid后,钙化明显减轻4.实验结果显示Lnc RNA Morrbid定位于细胞质,调控转录后修饰过程。结论:总之,我们的研究产生的证据初步阐明了lnc RNA Morrbid在血管钙化中的作用,并为lnc RNA作为血管钙化的诊断和治疗提供了新的思路。