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目的: 构建DENV-2 M株和NGC株E基因部分序列原核表达质粒，进行蛋白表达、鉴定和纯化，接种HUVEC细胞，并制备多克隆抗体。研究两株DENV-2 E基因部分序列原核蛋白的表达及其对HUVEC通透性的影响。 方法: 将DENV-2 M株和NGC株E基因部分序列克隆入原核表达载体pET28a(+)，分别命名为pET28a(+)-M和pET28a(+)-N，经PCR、双酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株，IPTG诱导表达、SDS-PAGE、Western-blot鉴定、纯化表达产物;将蛋白经SDS-PAGE电泳后切胶研磨制成抗原，免疫BALB/c小鼠制备抗血清;并接种HUVEC单层细胞，全波长酶标仪检测通透性的改变，倒置显微镜观察细胞的形态变化，透射电镜观察细胞微结构的改变。 结果: 1.成功构建了pET28a(+)-M和pET28a(+)-N原核表达重组质粒，并诱导表达了重组蛋白，Western-blot表明该目的蛋白可与抗His标签单克隆抗体结合。 2.用Ni离子柱亲和层析法进行纯化获得较高纯度的原核蛋白，纯度约90％。 3.制备了小鼠抗DENV-2 M株和NGC株E基因部分序列蛋白多克隆抗体。 4.将表达蛋白接种HUVEC单层细胞，全波长酶标仪检测通透性的改变，发现接种M蛋白后30min-24h及32h-48h对HUVEC通透性的影响较为明显，12h时最明显;而N蛋白对HUVEC的影响发生在30min-48h，3h最明显;30min-10h及24h-36h时间段，N蛋白作用强于M蛋白;10h-24h及36h-48h内，M蛋白作用强于N蛋白。 4.倒置显微镜观察接种NGC株E蛋白3h时的细胞形态，可观察到细胞间隙增宽程度较M株严重，多数细胞间连接断裂，出现细胞皱缩。M株E蛋白接种12h时细胞间隙明显增宽，细胞间连接断裂，有细胞融合现象。 5.M株E蛋白接种12h时经透射电镜观察可见HUVEC局部核膜间隙明显增宽，部分线粒体嵴消失甚至空化，微绒毛脱落，包膜不完整;接种NGC株E蛋白3h时观察到细胞膜出现局部破裂，细胞微绒毛结构几乎完全消失，大量线粒体空泡化且程度较严重，线粒体嵴消失。 结论:聚丙烯酰胺凝胶可作为佐剂免疫动物，制备的多克隆抗体具有良好的特异性;E基因部分序列原核蛋白可与HUVEC结合; E基因部分序列原核蛋白对HUVEC的通透性和细胞形态及其微结构有明显影响。