随着人民生活水平的提高以及经济全球化的发展,食品安全逐渐成为全球共同关注的话题。食品安全事件屡见不鲜,其中由沙门氏菌导致的食品安全事件占较大比例。传统培养方法作为检测的“金标准”,费力且耗时,一般需要5～7天,无法满足现场快速检测的需求。因此,亟需建立一种简单、快速、特异、灵敏、高效的沙门氏菌现场检测方法。本研究建立了一种FTA膜(Flinders technology associates,FTA)结合跨越式滚环等温扩增技术(Saltatory rolling circle amplification,SRCA),即 FTA-SRCA 技术,用于检测食品中的沙门氏菌。FTA-SRCA方法是利用FTA膜吸附固定核酸的方法快速提取模板DNA,进行SRCA反应。SRCA反应只需一对引物和一种聚合酶,恒温条件下在能够实现集约化检测的凹孔板中进行。通过向扩增产物中添加染料,实现检测结果的可视化判定。针对沙门氏菌的invA基因设计并筛选特异性引物,对46株菌株进行引物特异性验证。结果显示,检测的17株沙门氏菌均为阳性结果,29株非沙门氏菌均为阴性结果,证实了引物具有良好的特异性。对FTA膜的处理条件以及SRCA的反应条件和反应体系进行了优化,确定了 FTA膜提取模板DNA的处理条件为:55～60℃干燥10 min,FTA纯化试剂冲洗2次,TE缓冲液冲洗2次,55～60℃干燥15 min。FTA-SRCA的反应温度为62℃,反应时间为40 min,反应体系为:0.75 mM dNTPs,0.75 × Bst DNA聚合酶缓冲溶液,3.0 mM Mg2+,0.5μM正反向引物,8 U Bst DNA聚合酶,无菌去离子水补足体系至20.00 μL。经过对SYBR Green I染料添加量进行优化,最终确定SYBRGreen Ⅰ(50 ×)染料的添加量为2.00 μL。利用试剂盒法和FTA膜法分别提取不同浓度的沙门氏菌纯培养物的基因组DNA,进行PCR、SRCA和FTA-SRCA试验,分别利用凝胶电泳法和可视化法进行结果的判定,分析比较三种方法的灵敏度。对于凝胶电泳法,FTA-SRCA的灵敏度为6.8 × 100 CFU/mL,比PCR方法高100倍,比SRCA方法高10倍;对于可视化法,FTA-SRCA的灵敏度为6.8 × 100 CFU/mL,比PCR方法高100倍,与SRCA方法相同。利用试剂盒法和FTA膜法分别提取人工污染牛奶样品中沙门氏菌的基因组DNA,进行PCR、SRCA和FTA-SRCA试验,分别利用凝胶电泳法和可视化法进行结果的判定,分析比较三种方法的检出限。对于凝胶电泳法,FTA-SRCA的检出限为3.2 × 100 CFU/mL,比PCR方法低1000倍,比SRCA方法低10倍;对于可视化法,FTA-SRCA的检出限为3.2 × 100 CFU/mL,比PCR方法低1000倍,与SRCA方法相同。利用PCR、SRCA和FTA-SRCA方法对60份样品中的沙门氏菌进行检测,以国家标准GB 4789.4-2016为基准,计算得FTA-SRCA方法的敏感性、特异性和符合率分别为 1 00.00%、94.64%、95.00%。综上所述,本研究建立的FTA膜结合跨越式滚环等温扩增技术检测食品中沙门氏菌的方法切实可行。该方法具有操作简单、成本低廉、检测时间短、特异性好、灵敏度高、检出限低等优点。FTA膜的核酸提取效果较好,且可重复使用,不会影响检测结果的准确性,对于大量样品可实现集约化检测,为相关的监督执法部门以及食品企业提供了可靠的技术支持。