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目的:1观察放射性脑损伤小鼠海马神经元凋亡相关蛋白:具体为Caspase-3指标、AIF指标及DNA断裂指标,探讨电针“百会”、“风府”及双侧“肾俞”对放射性脑损伤小鼠海马神经元凋亡的保护作用,初步揭示其拮抗海马区神经元凋亡的作用机制。2观察放射性脑损伤后小鼠脑组织超微结构,研究电针穴位对辐射损伤后海马神经元、突触超微形态的影响;检测海马神经元synapsin-Ι及其mRNA表达变化,初步探讨电针“百会”、“风府”及双侧“肾俞”对放射性脑损伤小鼠突触可塑性的保护作用机制。方法:SPF级别C57BL/6J小鼠,总共80只,购买时为出生1月,随机数字分成空白对照组、放射线照射模型组、电针穴位组(1周、2周、3周)、电针非穴位组(1周、2周、3周),每组10只。运用放射线照射(8Gy)造小鼠放射性脑损伤模型并于第二日开始进行电针针刺治疗。针刺结束后第二日,用2%戊巴比妥钠(0.1ml/10g)深度麻醉,开胸暴露心脏,穿刺针经左心室穿刺至升主动脉,用0.1mol/L的PBS液(PH7.4)30ml灌注冲洗血管约10min,断头,冰床上快速取脑,部分分离出海马组织。用免疫组织化学方法、透射电镜、WB(synapsin-Ι)及Q-PCR(synapsin-ΙmRNA)检测海马区神经元凋亡(Caspase-3、AIF、TUNEL)变化、神经元及突触超微结构改变、突触蛋白及其mRNA表达的变化。结果:1.免疫组织化学方法检测TUNEL、AIF及Caspase-3统计结果显示:与相比,放射线照射模型组小鼠TUNEL、AIF及Caspase-3阳性细胞IOD值均明显高于空白组,提示海马凋亡细胞增加,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.001,P<0.05)。与放射线照射模型组小鼠相比,电针穴位1W组小鼠AIF、Caspase-3阳性细胞IOD值明显降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);电针穴位2W组小鼠AIF阳性细胞IOD值明显降低,有统计学意义(P<0.01);电针穴位3W组TUNEL、AIF及Caspase-3阳性细胞IOD值均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.001,P<0.05)。2.神经元超微结构统计结果:与空白组相较,放射线照射模型组小鼠神经元核间隙减小显着、神经元核质比有所升高,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.01)。与放射线照射模型组相比,电针穴位1W、2W组小鼠神经元核间隙及电针穴位1W组小鼠神经元核质比无明显差异;电针穴位3W组小鼠神经元核间隙及电针穴位2W、3W组小鼠神经元核质比增加,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05、P<0.01);电针非穴位各组小鼠核间隙、核质比无明显改变。3.突触超微结构统计结果显示:与相比,放射线照射模型组小鼠突触间隙、PSD厚度明显低于空白组,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与放射线照射模型组相比,电针穴位1W、2W组小鼠突触间隙、电针穴位1W组小鼠突触PSD厚度均未见明显统计学差异;电针穴位3W组小鼠突触间隙显著增大,有统计学意义(P<0.001),电针穴位2W、3W组小鼠突触PSD厚度显著增加,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.001);电针非穴位1W、2W、3W组小鼠突触间隙、PSD厚度无明显改变,差异无统计学意义。4.线粒体超微结构统计结果显示:与空白组相比较,放射线模型组小鼠海马区线粒体数密度、表面积密度、体密度、比表面显著降低,有统计学差异(P<0.05,P<0.001,P<0.01,P<0.01)。与放射线照射模型组相比,电针穴位1W组小鼠海马区Nvmit、S_Vmit、V_Vmit、dmit无明显改变;电针穴位2W组小鼠海马区Nvmit、S_Vmit、dmit无明显改变,但V_Vmit有所增加,有统计学差异(P<0.01);电针穴位3W组小鼠海马区Nvmit、S_Vmit、V_Vmit、dmit均增加明显,有统计学差异(P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01)。5.Q-PCR检测海马区synapsinΙmRNA表达统计结果示:与空白组相比,放射性射线照射模型组小鼠海马组织synapsinΙmRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与放射性射线照射模型组相较,电针穴位1W组小鼠海马组织synapsinΙmRNA表达无统计学意义;电针穴位2W、3W组小鼠海马组织synapsinΙmRNA表达均有显著升高,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.001);电针非穴位1W、2W组小鼠海马组织synapsinΙmRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01);电针非穴位3W组小鼠海马组织synapsinΙmRNA表达无统计学改变。与电针非穴位1W组相比,电针穴位1W组小鼠海马组织synapsinΙmRNA表达改变不明显;与电针非穴位2W组相比,电针穴位2W组小鼠的海马组织中synapsinΙmRNA灰度值升高,差异显著(P<0.01)。与电针非穴位3W组相比,电针穴位3W组小鼠海马组织synapsinΙmRNA灰度值的改变更加显着(P<0.001)。6.Western blot法检测海马区synapsinΙ蛋白统计如下:对比空白组,放射性射线照射模型组小鼠海马组织synapsinΙ蛋白表达的低(P<0.05)。与放射性射线照射模型组相较,电针穴位1W、2W、3W组小鼠海马组织synapsinΙ蛋白表达均有明显示升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.01);与此同时,灰度值显示电针非穴位1W组小鼠海马表达也升高显着(P<0.001)。与各电针周期相同的非穴位组相比,电针穴位1W组小鼠海马组织synapsinΙ蛋白表达低于同期非穴位组(P<0.05);电针穴位2W组小鼠海马组织synapsinΙ蛋白表达与同期非穴位组无统计学差异;电针穴位3W组情况与电针穴位2W相同。结论:1.电针“百会”、“风府”、“肾俞”穴位可有效减少放射性脑损伤小鼠海马区神经元凋亡诱导因子及凋亡蛋白的表达,降低辐射对细胞DNA的损伤,拮抗放射线照射脑损伤后细胞凋亡。2.电针可以促进海马突触可塑性,其机制可能是改善海马区神经元、突触、线粒体超微结构,并上调突触素ⅠmRNA及其蛋白的表达。