论文部分内容阅读
目的考察叶黄素对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤及原代神经元细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及其相关作用机制。方法1.取新生4日龄的SD大鼠随机分为Sham组、HIBD组、Lutein组,待其7日龄时构建新生大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)体内模型。采用干湿重法检测各组大鼠的脑水肿程度;采用TTC染色法检测各组大鼠的脑组织梗死体积;采用自主活动实验检测各组大鼠的自主活动能力;采用Morris水迷宫实验检测各组大鼠的空间学习记忆能力。2.采用HE染色实验、TUNEL染色实验检测各组大鼠脑组织中神经元的凋亡情况;采用免疫组化、Western blotting实验检测各组大鼠脑组织中相关蛋白的表达水平,探讨叶黄素发挥脑保护作用的分子机制。3.从新生24 h内的SD大鼠脑组织中分离培养原代神经元细胞,随机分为Control组、OGD组、Lutein组,培养至第7天构建神经元细胞氧糖剥夺(OGD)损伤模型。采用MTT实验检测各组神经元细胞的生存率;采用LDH释放比实验检测各组神经元细胞间LDH释放量。4.采用Hoechst 33258染色实验检测各组神经元细胞的核凋亡情况、采用免疫荧光实验检测各组神经元细胞核蛋白NeuN的表达情况。结果1.叶黄素可显著减轻新生大鼠HIBD后脑组织水肿程度、减小新生大鼠HIBD后脑组织梗死体积;叶黄素显著提高新生大鼠HIBD后的自主活动能力及空间学习记忆能力。2.叶黄素可显著减轻新生大鼠HIBD后脑组织中皮层和海马组织中神经元的凋亡。叶黄素可显著增加新生大鼠HIBD后大脑皮层和海马组织中NeuN蛋白的表达,上调p-PI3K、p-Akt蛋白的表达,下调p-GSK-3β的表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的表达,下调促凋亡蛋白Bax、Bad的表达。3.叶黄素可显著增加OGD诱导的神经元细胞的生存率,减少细胞膜内LDH的释放。4.叶黄素可显著减弱OGD诱导的神经元细胞核损伤,增加OGD诱导的神经元细胞中NeuN蛋白的表达。结论叶黄素对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤及新生大鼠原代神经元细胞氧糖剥夺损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能与PI3K/AKT/GSK-3β信号传导及细胞线粒体凋亡通路抑制相关。