【摘 要】
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目的表达并纯化人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白,为后期的拮抗NS1蛋白的短肽筛选工作奠定基础。方法(1)用RT-PCR法从人甲型流感病毒株A/PR/8/34/(H1N1)中扩增NS1基因,克隆入原
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目的表达并纯化人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白,为后期的拮抗NS1蛋白的短肽筛选工作奠定基础。方法(1)用RT-PCR法从人甲型流感病毒株A/PR/8/34/(H1N1)中扩增NS1基因,克隆入原核表达载体pTXB1,构建重组原核表达质粒pTXB1/NS1,经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析NS1蛋白表达形式和表达量。(2)将1.0 mmol/L IPTG加入到重组表达载体pTXB1/NS1中,分别在26℃、28℃、30℃、32℃、35℃和37℃诱导表达4 h;在最佳诱导温度下,分别诱导4 h、8 h和12 h,寻求最佳的表达时间。(3)用几丁质柱亲和层析纯化表达蛋白,12% SDS-PAGE电泳对纯化的NS1蛋白进行鉴定,最后用串联飞行时间质谱仪检测NS1蛋白相对分子质量。结果所构建的重组表达质粒pTXB1/NS1序列完整,插入的基因片段全长690 bp。以1.0 mmol/L IPTG、37℃诱导4 h,重组蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的50%以上,破菌上清及沉淀中均有目的蛋白表达。纯化的NS1蛋白纯度达95 %以上,相对分子质量为26 340,与预期大小相符。结论(1)本试验成功表达A/PR/8/34/(H1N1) NS1蛋白。(2)经几丁质柱亲和层析纯化得到NS1蛋白。
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