桑疫病的分子检测及其病原菌发酵生产冠菌素的研究

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桑丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae Pv. mori Van Hall)是桑疫病的致病菌,桑疫病是桑树的常见病害之一,又称桑细菌病,主要为害桑叶,近年来其疫情严重影响了蚕桑产业的正常发展。冠菌素(coronatine, COR)是一种由丁香假单胞菌的植物致病变种产生的植物生长物质,对于植物细菌病的发病和爆发有重要影响。本文从桑疫病致病菌的产冠菌素活性入手,通过研究致病菌产冠菌素与冠菌素调节桑树两方面,为明晰菌株-冠菌素-桑疫病三者关系提供了新的思路,为综合防治桑疫病奠定了基础,同时桑丁香假单胞菌作为一种新型的产冠菌素菌株,其较高的产冠菌素活性和耐温性,也为打破冠菌素发酵的工业化瓶颈提供了良好的野生菌株。从桑疫病桑园通过选择性培养基筛选建立了桑疫病生境菌库。以科赫法则和16SrDNA序列相似性分析确定M4-13为桑丁香假单胞菌。初步探索和优化了桑丁香假单胞菌M4-13发酵产冠菌素的条件,发酵液的质谱图和HPLC谱图均验证了桑丁香假单胞菌的产冠菌素活性。通过M4-13生长速率-温度的研究,得到其最适生长温度为32℃,耐温范围在3℃到40℃之间。单因素法优化红糖发酵培养基可以显著提高M4-13的冠菌素发酵产量达300%。通过冠菌素对于多向生理调节作用的研究,发现了冠菌素浓度1μmol/L时,桑叶中1-DNJ提高了120%,黄酮提高了80%,多糖含量下降了48%。
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