目的： 本研究采用由外周血单核细胞体外诱生DCs的方法，观察卵巢癌患者外周血来源MoDCs的生物学特性，为临床进行免疫治疗提供依据。 材料与方法： 本研究共选择21名妇女，其中8名为卵巢癌患者，13名为健康女性志愿者。卵巢癌患者选自2005年12月～2006年7月，在中山大学肿瘤医院妇科住院治疗的患者，取血前未接受过化疗或放疗。对所有研究对象均抽取外周静脉血约35ml进行实验。 将抽取的外周静脉血通过密度梯度离心法分离出单个核细胞。再通过细胞贴壁的方法将单个核细胞进一步分离出单核细胞(粘附细胞)和淋巴细胞(非粘附细胞)。用含粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF)和人白细胞介素4(interleukin 4，IL-4)的完全培养基对单核细胞进行诱导，用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)刺激其成熟。7天后收集细胞(即monocyte-derived DCs，MoDCs)，其中一部分用流式细胞仪检测细胞表型，以平均荧光强度(mean fluorescence intensity，MFI)表示DCs表面分子的含量。设置IgG标记管的DCs发出的荧光为阴性对照，以排除非特异性荧光的干扰。收集的另一部分细胞(MoDCs)作为刺激细胞参与混合淋巴细胞反应(Mixed Leukocytes Reaction，MLR)。而MLR反应所需的反应细胞则来自上述单个核细胞分离所得的异体淋巴细胞，将MoDCs与异体淋巴细胞按1：500、1：100、1：50及1：10的比例混合培养。另设立空白孔组，不加刺激物MoDCs，仅为异体淋巴细胞。MTT法于波长570nm处检测吸光度值(OD值)，了解MoDCs刺激增殖的能力。采用t检验比较卵巢癌患者和健康妇女MoDCs细胞表型的表达水平，以及两组研究对象的MoDCs刺激异体淋巴细胞增殖的能力。 结果： 1．MoDCs的形态学观察 卵巢癌患者或健康妇女的单核细胞培养24h时，细胞体积小，圆形，贴壁生长。培养第3天可见部分细胞聚集成团生长，体积增大，形态略不规则，表面有少量的小突起。至培养第7天，可见细胞悬浮生长，聚集成团，细胞体积大，形态不规则，表面有大量伸展的毛刺状突起，为典型的树突状细胞形态。 2．细胞表型分析 卵巢癌患者及健康妇女MoDCs均表达丰富的HLA-ABC(MHC-I)、HLA-DR(MHC-Ⅱ)。卵巢癌组MoDCs的HLA-ABC、HLA-DR的MFl分别为32.32±9.30及62.42±51.83，而这两种分子的MFI在健康妇女组则为40.78±11.36及58.83±25.47。统计分析显示，MoDCs的HLA-ABC和HLA-DR在卵巢癌组及健康妇女组的表达强度相当，差异无显著性(p>0.05)。 两组妇女的MoDCs均表达大量共刺激分子CD86和CD80。卵巢癌患者的MoDCs表面CD86和CD80的MFl分别为32.13±7.00和34.94±29.11，在健康妇女组分别为47.37±22.32和30.79±15.42。虽然卵巢癌组CD86的表达强度低于健康妇女组，而卵巢癌组CD80的表达强度高于健康妇女组，但其差异均无统计学意义(p>0.05)。 3．混合淋巴细胞反应 本实验中，空白孔的OD值反映了淋巴细胞在培养液中自然分裂增生的能力。在卵巢癌患者，空白孔组的OD值为0.395±0.063，而在MoDCs与异体淋巴细胞按1：500比例的混合培养组，OD值升高至0.454±0.080，与空白组相比有显著性差异(p<0.05)。同样，在健康妇女组中，空白组OD值也明显低于加有不同比例MoDCs作为刺激细胞的各组的OD值(p<0.05)。比较卵巢癌患者和健康妇女的MoDCs刺激异体淋巴细胞的增殖能力，卵巢癌患者各比例组的OD值均明显低于健康妇女相应比例组的OD值，其差异有统计学意义(p<0.05)。在卵巢癌组，MoDCs与异体淋巴细胞的比例为1：500时，OD值为0.454±0.080。而当该比例增至1：10时，OD值则上升到0.609±0.090，差异有统计学意义(p<0.05)；在健康妇女组也有相似的结果。 结论 1．卵巢癌患者外周血单核细胞能在体外培养分化出形态学上典型的成熟DCs。 2．体外培养诱生的卵巢癌患者的MoDCs具有完备的发挥其独特免疫功能的细胞表型。 3．卵巢癌患者的MoDCs与健康妇女的MoDCs一样，均具有强大的刺激异体淋巴细胞增殖的能力。并且，随着MoDCs比例的增加，其刺激淋巴细胞增殖的能力增强。 4．卵巢癌患者的MODCs刺激异体淋巴细胞增殖能力较健康妇女降低，提示卵巢癌患者来源的MoDCs存在一定程度的免疫学功能异常。