论文部分内容阅读
第一部分BLP耐受对人THP-1细胞TLR2及其下游信号转导和TNF-α表达的影响目的观察不同剂量细菌脂蛋白（BLP）刺激后，人单核细胞（THP-1）Toll样受体2（TLR2）、髓系分化因子88蛋白（MyD88）表达及肿瘤坏死因子（TNF-α）含量的变化。方法用小剂量BLP诱导THP-1产生耐受，再以大剂量BLP攻击，分别比较对照组、BLP耐受组、耐受后攻击组和直接攻击组TLR2、MyD88和TNF-α的表达。以Western Blot测定TLR2和MyD88蛋白含量。ELISA法测定TNF-α含量。结果BLP耐受组、耐受后攻击组和直接攻击组的TNF-α水平均高于对照组，而耐受后攻击组的TNF-α表达明显低于直接攻击组，各组间TLR2和MyD88蛋白含量无明显改变。结论BLP可刺激机体产生炎症因子，小剂量BLP诱导THP-1细胞产生BLP耐受，抑制细胞表达TNF-α，但不同剂量BLP对TLR2和MyD88的蛋白表达无影响。第二部分脓毒症对心脏功能的影响及BLP耐受的保护作用目的了解脓毒症对小鼠心脏功能的影响，观察细菌脂蛋白耐受对心功能的保护作用并研究其作用机制。方法成年雄性C57BL／6小鼠随机分为3组：假手术组、脓毒症组（剖腹手术行盲肠结扎穿孔致脓毒症）、BLP耐受+脓毒症组，以假手术组术前（0h）作为正常对照。分别在0h、2h、6h、12h四个时间点做小鼠二维超声心动图选择心率（HR）、左心室短轴缩短率（％FS）、射血分数（EF％）、心输出量（CO）等做为观测指标。Western blot测定心肌细胞TLR2蛋白表达，心肌匀浆测定细胞因子TNF-α浓度。心肌免疫组化观察心肌组织内巨噬细胞浸润情况。结果假手术组的HR、FS和EF自0h至6h呈持续上升趋势，术后6h达顶点（与0h相比p＜0.05），此后下降，术后12h接近0h水平；CO自0h下降，2h时达最低（与0h相比p＜0.05），此后回升，12h时接近0h水平。脓毒症组的HR、FS和EF术后短暂上升，2h后HR和FS有所下降，EF上升趋缓，6h时HR、FS和EF仍高于0h水平，但此后明显下降，至12h时降至低于0h水平；而CO自0h呈持续下降，至12h明显低于0h水平（p＜0.05）。BLP耐受+脓毒症组0h至6h时段HR、FS、EF和CO的变化趋势与脓毒症组相同，但前者FS、EF和CO的值均低于脓毒症组（P＜0.05）；而6h后脓毒症组的4项指标继续下降，BLP耐受+脓毒症组转而上升，至12h时显著高于脓毒症组（P＜0.05）。心肌细胞TLR2蛋白表达及心肌匀浆中TNF-α含量各组间无差异。心肌免疫组化显示，对照组及假手术组各时相均未见巨噬细胞浸润，脓毒症组12h时出现巨噬细胞浸润，BLP耐受+脓毒症组2h时见巨噬细胞浸润，6h及12h均未见巨噬细胞浸润。结论手术对心脏功能有抑制作用；脓毒症对心脏功能有明显抑制：BLP耐受具有心功能保护作用：脓毒症早期心功能的变化可能与心肌细胞内炎症反应无关。