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目的:经不同径路实现重组腺相关病毒在常用实验动物内耳的局部基因转染,得到较佳手术径路后,利用重组腺相关病毒作为载体实现X连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)在内耳的过表达,观察其能否拮抗顺铂和卡铂的耳毒性。方法:1.不同径路实现重组腺相关病毒在实验动物内耳的局部基因转染:采用不同径路完成病毒的内耳注射后,各部分实验动物均在术后两周检测闭合声场ABR阈值,处死观察听泡内有无感染,取基底膜免疫组化染色后铺片观察转染效率。2.耳蜗局部转染XIAP基因拮抗顺铂耳毒性:豚鼠行耳后入路使用Ⅱ型胶原蛋白酶处理圆窗后经圆窗渗透径路,一侧显微注射r AAV8-XIAP-6myc,另一侧给予生理盐水。术后分为顺铂给药组和对照组,1周后进行外源性和内源性XIAP的western-blot实验,检测双侧闭合声场ABR,计数外毛细胞和螺旋神经节神经细胞。3.耳蜗局部转染XIAP基因拮抗卡铂耳毒性:确定适用卡铂剂量之后,行耳后入路鼓阶切开径路,一侧显微注射r AAV8-XIAP-6myc,另一侧给予生理盐水,腹腔注射卡铂1周后检测双侧闭合声场ABR和CAP,计数内毛细胞。结果:1.豚鼠的圆窗膜渗透径路没有造成听力损伤且实现了底回外毛细胞40%以上的转染;灰鼠内耳解剖结构特殊,鼓阶切开径路可以实现内毛细胞底回和中间回80%以上的转染。2.1)western-blot结果提示r AAV成功实现了外源性XIAP在内耳的过表达;2)r AAV侧的ABR阈值、毛细胞计数和螺旋神经节神经细胞计数对比生理盐水侧均有统计学差异。3.对比r AAV侧和生理盐水侧,仅在4k HZ存在CAP幅值和内毛细胞计数的统计学差异。结论:1.胶原酶处理圆窗后渗透径路和鼓阶切开径路分别是豚鼠和灰鼠内耳基因转染的较佳径路。2.r AAV-XIAP的内耳局部转染成功提高了XIAP的表达,可以在一定程度上拮抗顺铂介导的外毛细胞和螺旋神经节神经细胞损伤。3.腺相关病毒介导的局部XIAP基因转染对灰鼠内毛细胞有一定地保护作用,但不能完全拮抗卡铂造成的听力损失。