论文部分内容阅读
目的：探讨SD大鼠蛛网膜下腔出血(Subarachnoid Hemorrhage，SAH)后自噬在基底动脉壁的表达情况，研究经枕大池注入半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cystatin C，CysC）对SD大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑血管痉挛(Cerebral Vasospasm，CVS)的干预作用，并分析其与自噬的相关性。材料和方法：五十只SD大鼠随机分为对照组（A组）、蛛网膜下腔出血组（B组）、安慰剂组（C组）、Cystatin C低浓度治疗组(DL组)和Cystatin C高浓度治疗组（DH组），每组10只。对照组在枕大池注入生理盐水但不注血，SAH组采用枕大池一次注血法制作SAH模型，治疗组在注血前30分钟经枕大池注入Cystatin C水溶剂0.1ml（其中低浓度和高浓度组剂量分别为2μg/0.1ml和10μg/0.1ml），而安慰剂组则在注血前30分钟经枕大池注入等量生理盐水。各组于术后48小时处死动物取脑基底动脉及周围脑干组织行病理检查，测定基底动脉血管内径周长和血管壁厚度，以此评价有无脑血管痉挛及程度。应用自噬标记抗体LC3和Beclin-1对各组基底动脉组织进行Western blot分析。结果：SAH组和安慰剂组中大鼠基底动脉内径周长较对照组明显缩短（P＜0.01），血管壁厚度明显增加（P＜0.01），可见管腔狭窄，内膜皱褶，内皮细胞肿胀、变形，部分坏死，平滑肌细胞肥大、排列紊乱。CysC治疗组中基底动脉内径周长增大，管壁增厚程度减轻以及CVS值下降，与SAH组及安慰剂组对比有显著性差异（P＜0.01），在高浓度治疗组更明显，与低浓度组相比有统计学意义（P＜0.05）。Westernblot结果显示自噬相关指标LC3和Beclin-1在对照组的基底动脉壁是低表达的，在SAH组及安慰剂组表达明显增高，其LC3/GAPDH、Beclin-1/GAPDH值与对照组比较有统计学意义（P＜0.05）。而在CysC治疗组，LC3和Beclin-1的表达进一步增高，以CysC高浓度组更明显，与SAH组及安慰剂组比较有显著性差异（P＜0.01）；CysC高浓度组与CysC低浓度组相比有统计学意义（P＜0.05）。结论：1、通过构建大鼠枕大池一次注血模型，能够观察到基底动脉发生明显的细胞形态改变、管壁的增厚以及管腔的狭窄，提示SAH后存在CVS。2、自噬在正常大鼠基底动脉壁的表达是低水平的。3、SAH后自噬在基底动脉壁被激活，提示自噬可能作为一种保护机制参与了CVS的病理及生理过程。4、经枕大池注入Cystatin C能诱导自噬在基底动脉壁的高表达，对CVS有一定的防治作用，并且这种作用与Cystatin C的浓度及其诱导的自噬的水平存在正相关性。