【摘 要】
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目的本研究旨在研究NDUFC1在促进胶质瘤恶性进展中的作用及其机制。方法本项研究由两部分组成。第一部分我们首先研究在人神经胶质瘤细胞中的NDUFC1表达水平以及NDUFC1对神经胶质瘤细胞的增殖、迁移和凋亡能力等生物学行为产生的影响。第二部分,运用凋亡蛋白抗体芯片和蛋白印迹实验探究NDUFC1对胶质瘤细胞功能影响的机制。为了确定NDUFC1表达在胶质瘤中是否发生改变,我们首先通过对177个病理证实
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目的本研究旨在研究NDUFC1在促进胶质瘤恶性进展中的作用及其机制。方法本项研究由两部分组成。第一部分我们首先研究在人神经胶质瘤细胞中的NDUFC1表达水平以及NDUFC1对神经胶质瘤细胞的增殖、迁移和凋亡能力等生物学行为产生的影响。第二部分,运用凋亡蛋白抗体芯片和蛋白印迹实验探究NDUFC1对胶质瘤细胞功能影响的机制。为了确定NDUFC1表达在胶质瘤中是否发生改变,我们首先通过对177个病理证实的胶质瘤组织进行了免疫组化染色。其中有15例胶质瘤组织标本脱片,剩余的162例样本均进行了临床资料相关性的进一步讨论。通过RT-q PCR检测NDUFC1在人胶质瘤常用细胞系中的表达情况并筛选合适细胞。构建NDUFC1RNA干扰慢病毒载体,转染SHG-44细胞和U251细胞,建立NDUFC1敲低的SHG-44和U251细胞系。通过使用免疫荧光技术、RT-q PCR、western blot实验检测慢病毒干扰后胶质瘤细胞的转染效率。在此基础上,我们将细胞分为敲低组（sh NDUFC1组）和阴性对照组（sh Ctrl组）,通过细胞活力实验来测定各组胶质瘤细胞的增殖变化。然后我们通过流式细胞技术、Transwell迁移实验和划痕愈合实验以及裸鼠皮下移植sh NDUFC1组和sh Ctrl组的胶质瘤细胞构建的皮下成瘤模型以研究NDUFC1敲低后对SHG-44和U251细胞系体内外生物学行为的变化。对U251细胞进行慢病毒感染干扰NDUFC1的表达后,我们进行了凋亡蛋白抗体芯片检测以及Western blot验证,探究NDUFC1抑制胶质瘤细胞凋亡的可能机制。结果1.免疫组化结果显示相比于正常脑组织的标本,在脑胶质瘤组织中NDUFC1蛋白的表达水平明显升高。而且NDUFC1的表达在病理分级,肿瘤复发等病理资料中存在显著性差异。即NDUFC1的表达随患者肿瘤的恶性程度而增加;NDUFC1的表达与肿瘤的复发呈正相关,即肿瘤复发患者中NDUFC1表达较高。2.慢病毒转染SHG-44、U251细胞系,构建NDUFC1敲低细胞系。结果表明NDUFC1敲低后细胞增殖减缓,迁移能力下降。并且NDUFC1敲低后可以促进了SHG-44、U251细胞的凋亡;并且SHG-44、U251细胞的细胞周期受到明显阻滞,主要阻滞在G2期;NDUFC1敲低后的胶质瘤细胞在裸鼠体内的生长受到明显抑制。3.慢病毒感染U251细胞干扰NDUFC1的表达后,我们进行了凋亡蛋白抗体芯片实验。当P<0.05时,且差异数超过20%,其中包括Bad、BIM、Caspase3、p21、TRAILR-1的5种凋亡相关蛋白表达上调,HSP60、胰岛素生长因子结合蛋白-2（IGFBP-2）和可溶性肿瘤坏死因子-受体1（s TNF-R1）3种凋亡相关蛋白表达下调。Western Blot对上述基因进行进一步相关通路蛋白表达验证。慢病毒感染后,与对照组相比,敲低组蛋白P-ERK,CDK1,CDK6,PIK3CA表达下调,蛋白ERK表达无明显的变化。结论较正常的脑组织,NDUFC1在人脑胶质瘤中的表达升高,且NDUFC1的表达量与患者病理等级和复发呈正相关。NDUFC1可能是以PI3K/AKT通路来调控神经胶质瘤细胞的增殖、凋亡等能力,从而在神经胶质瘤的发生以及发展的过程中发挥作用。
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