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人甲状旁腺激素（HumanParathyroid hormone, hPTH）是一个有84氨基酸的单链多肽激素，可以通过调节钙离子在体内的平衡直接作用于肾脏和肝脏。临床研究表明甲状旁腺素N端的1-34个氨基酸是一种骨合成代谢剂，能够恢复骨矿物质密度，对hPTH（1-34）的研制是生物制药的一个热点。人血清白蛋白（HSA）与hPTH（1-34）二联体(PTH（1-34）ab)融合，可以有效延长PTH在体内的半衰期，然而，通常毕赤酵母表达融合蛋白hPTH（1-34）ab-HSA会发生N端随机丢失现象，影响融合蛋白的表达质量。为了解决这一问题，本文利用酿酒酵母进行完整表达hPTH（1-34）ab-HSA的探索。为构建酿酒酵母hPTH（1-34）ab-HSA表达质粒，本研究通过设计特异性引物，利用重叠PCR技术，将α-Factor信号肽基因与hPTH（1-34）ab-HSA基因融合，得到α-hPTH（1-34）ab-HSA基因片段，并插入到pYX212质粒中，得到pYX212-α-hPTH（1-34）ab-HSA重组质粒，测序表明质粒构建完成。通过LiAc转化法将重组表达质粒pYX212-α-hPTH（1-34）ab-HSA转化S. cerevisiae W303-1A，利用缺乏尿嘧啶的SC培养基筛选重组菌，并利用菌落鉴定得到阳性转化子，利用Western blot鉴定表达产物。结果表明，酿酒酵母表达的融合蛋白hPTH（1-34）ab-HSA具有很好的HSA和hPTH抗原性。为了探索提高融合蛋白产量的途径，将质粒原有的TPI组成型启动子替换成GAL1诱导型启动子，结果表明，诱导型启动子可以提高融合蛋白的产量10%左右，但从生产周期，以及节约成本等方面综合考虑，组成型TPI启动子的重组菌略占优势。为有效的检测融合蛋白的表达完整性，将6×His标签插入hPTH（1-34）ab-HSA基因与α-Factor信号肽基因之间的EcoR I酶切位点，构建带有组氨酸标签的重组质粒pYX212-α-HIS-hPTH（1-34）ab-HSA。将带有组氨酸标签的重组质粒pYX212-α-HIS-hPTH（1-34）ab-HSA转化S. cerevisiae W303-1A，Western blot鉴定表达产物显示，融合蛋白HIS-hPTH（1-34）ab-HSA具有良好的HIS、HSA和hPTH抗原性，表明融合蛋白hPTH（1-34）ab-HSA的N端表达完整。工程菌表达结果表明，与毕赤酵母表达相比，利用酿酒酵母可以完整表达hPTH（1-34）ab-HSA。通过对摇瓶条件进行初步发酵优化，确定为：接种量10%，葡萄糖浓度为30g/L，酵母粉12g/L，装液量30mL/250mL，温度30oC，pH6，转速200r/min，表达量可达到8.11mg/L，比优化之前提高了23%左右。