人TRAIL cDNA的克隆、序列测定及其在COS-7细胞中的表达

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肿瘤坏死因子相关的调亡诱导配体(TRAIL)是1995年由Wiley SR等克隆的肿瘤坏死因子(TNF)家族新成员,在结构和功能上类似于TNF的另一成员Fas/Apo-1L.TRAIL能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,但对于正常细胞没有或很少有这种作用,因此很有希望成为新一代的抗 肿瘤制剂.该文利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HL-60细胞总RNA中扩增出846bp人TRAIL编码区全长cDNA,克隆至pGEM-T载体中,进行了序列测定,证明其序列与国外文献报道的一致.在此基础上,亚克隆至真核细胞表达载体pcDNA3中,脂质体法转染COS-7细胞,分别收集上清和细胞裂解液,观察是否能够诱导U937细胞凋亡.流式细胞分析表明,48小时后,培养上清能够诱导U937细胞凋亡.
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