降胆固醇菌株发酵条件的优化及降解产物的初步研究

来源 :天津商学院 天津商业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:redsouler
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根据生长量和酶活力两项指标,对初筛获得的17株同化降解胆固醇的细菌进行比较,发现F-1菌株生长快,生物量大,酶活性高,因此将其作为出发菌株进行进一步的研究.从通气量,培养温度,pH,酵母膏,胆固醇和表面活性剂等方面进行单因素的优化,随后采用响应面法对培养基的成分进一步优化,首先用部分重复因子试验对培养基组分NH<,4>NO<,3>,KH<,2>PO<,4>,MgSO<,4>.7H<,2>O,酵母膏,Tween-80和胆固醇对产酶量的影响进行了评价,并找出主要的影响因子为酵母膏和Tween-80,前者为正效应,后者为负影响,其他组分对酶活力的影响不显著.第二步用最陡爬坡路径逼近最大响应区域.最后用中心组合设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度.预测菌株在优化培养基的酶活力为1.982×10<-3>U/ML.通过研究发现F-1菌株产胆固醇降解酶最佳培养基配方的组成为:NH<,4>NO<,3>1.0g/l;KH<,2>PO<,4> 0.25g/l;MgSO<,4>.7H<,2>O 0.25g/l;FeSO<,4>.7H<,2>O 1mg/l;酵母膏5.694g/l;Tween-80 0.905ml/l,胆固醇1.0g/l.在含有65mL发酵培养液的三角瓶(250mL)中的最佳发酵条件为:pH7,28℃,发酵30h.采用毛细管气相色谱法比较优化前后胆固醇的降解情况,优化前将粗酶液加入到胆固醇反应体系中,胆固醇的浓度从99.6258%变为96.3830%.优化后加入酶,胆固醇的浓度变为92%.可以看出菌株在优化后的培养条件下,产酶量有了很大提高,促进了对胆固醇的降解.
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