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目的:通过观察活血清热利湿方(简称W)及其拆方活血组(简称H:蚤休、川楝子)、清热组(简称Q:知母、白头翁)、利湿组(简称:萆薢、五倍子)对子宫颈癌细胞SiHa增殖抑制和EGFR-PLC-γ1-PKCα信号转导通路的影响,研究活血、清热、利湿法治疗子宫颈癌的机理,探讨瘀血、热毒及痰湿与子宫颈癌病变和EGFR-PLC-γ1-PKCα信号转导的关系。 方法:采用人子宫颈癌细胞SiHa为实验对象,用倒置显微镜观察细胞生长情况,并计算细胞抑制率,以筛选出有效的药物;用正交试验优选出疗效最好的方剂;设对照组和用活血清热利湿全方及其三个拆方处理细胞,在倒置显微镜下观察SiHa细胞生长及形态改变,用Western blot检测SiHa细胞EGFR-PLC-γ1-PKCα信号转导通路各蛋白表达的影响。 结果:1.活血清热利湿方及其拆方对SiHa细胞增殖明显抑制,对细胞形态作用明显不同,清热组细胞疏松膨胀,细胞变成圆球形,胞内充满大量颗粒状或空泡样物质,皿中有少量细胞碎片细胞间隙加大;活血组细胞表面粗糙、皱缩,透光度低,形态不规则,皿中视野可见有许多细胞碎片,并可见较多漂浮发亮的圆形细胞;利湿组可见细胞皱缩,透光度减低,形态不规则,贴壁性变差,细胞碎片增多;全方组细胞形态与活血组和利湿组较为接近,细胞表面粗糙,多数细胞呈现不规则形态,皿中有大量的细胞碎片。2.活血清热利湿全方及其拆方均能抑制SiHa细胞生长,全方作用最强,随药物浓度的增加,对细胞生长抑制呈现剂量—效应依赖关系。3.人子宫颈癌SiHa细胞可检测到EGFR、PLC-γ1、PKCα蛋白分子的过度表达。4.当用IC50药物剂量处理细胞时,活血清热利湿全方及其拆方均能抑制EGFR-PLC-γ1-PKCα信号转导各蛋白表达水平,其作用强弱依次为W>H>Q>L。 结论:1.活血清热利湿方及其拆方对于人子宫颈癌细胞SiHa的增殖有着明显的抑制作用,而其中又以全方组的效果最明显;活血组、清热组次之、利湿组效果较一般。2.子宫颈癌的发病与EGFR-PLC-γ1-PKCα的信号转导表达增强有着密切相关。3.活血清热利湿方及其拆方通过对SiHa细胞EGFR-PLC-γ1-PKCα信号转导的各个蛋白的表达水平的减少的来达到抑制子宫颈癌细胞增殖的作用。4.通过药物效果关系的反证,EGFR-PLC-γ1-PKCα信号表达和增强与宫颈癌疾病中的血瘀、热毒、痰湿关系密切。