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肾脏疾病是影响儿童健康的重要疾病,其发病机制多复杂,易于复发,治疗棘手。近年来的研究发现,5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)介导的表观遗传学参与了多种生物学过程,但有关Tet2介导的DNA去甲基化在肾脏发育及肾脏疾病中的调控作用研究甚少。目的:既往研究表明5-hmC介导的表观遗传学调控在肾脏疾病中可能发挥重要作用,因此我们希望通过相关实验进一步研究该DNA去甲基化修饰参与肾脏发育及肾脏疾病的发生发展。方法:1.采用免疫荧光染色分别观察小鼠肾脏细胞、体外培养足细胞中5-hmC及Tet2的表达水平以及进一步qRT-PCR检测不同发育阶段野生型小鼠肾脏Tetl、Tet2和Tet3的表达水平。2.Tet2敲除后,采用dot blot检测肾脏不同发育阶段中5-hmC含量变化以及进一步研究Tet2敲除后,通过非靶标代谢组学分析及经IPA生物反应路径分析软件分析检测Tet2敲除对肾脏形态和功能方面的影响。3.最后与临床有机结合,通过免疫荧光染色观察5-hmC在人体肾脏中的表达以及qRT-PCR检测临床肾病综合征患者肾穿组织中Tetl、Tet2 mRNA的变化。结果:1.本实验验证了 5-hmC广泛存在于哺乳动物肾脏DNA中。进一步检测发现在小鼠成长发育过程中肾脏组织中Tetl、Tet2、Tet3表达水平随日龄增加逐渐衰减,而三者中Tet2的表达维持在较高水平。再进一步检测表明Tet2存在于小鼠肾小球细胞和肾小管细胞细胞基因组D NA中。2.进一步检测Tet2敲除对肾脏形态和功能方面的影响,Tet2敲除可引起5-hmC含量减少,表明在肾脏发育各阶段Tet2在DNA去甲基化过程中起了重要作用。同时通过非靶标代谢组学分析及经IPA生物反应路径分析软件分析得到结果:Tet2敲除可以诱导相关炎症因子功能改变,引起相关炎症反应相关的病理过程,推论Tet2可以抑制代谢紊乱引起的炎症反应。3.5-hmC在人体肾脏中的丰富表达,并且检测到在MCNS中Tet2表达较正常人增加,这提示该肾病中可能存在着DNA甲基化氧化通路异常。上述结果提示MCNS发病过程中DNA去甲基化增加,Tet2介导的DNA去甲基化可能减轻、延缓MCNS的发生与发展,5-hmC可能是一种具有保护作用的负反馈调节机制。结论:Tet2介导的DNA去甲基化可能参与肾脏发育以及MCNS的发生与发展。