目的:研究巨噬细胞冠蛋白1(Coronin-1)与分枝菌酸(MA)诱导细胞泡沫化的相关性及其可能机制。方法:1.据Coronin-1表达水平的差异,实验分为RAW264.7-Cor.Plus(过表达)、RAW264.7(正常表达)和RAW264.7-Cor.Minus(抑制表达)三组。三组细胞分别用(0、25、50、75、100)μg/mL MA包被的聚苯乙烯微球作为吞噬颗粒,分别吞噬24、48、72 h,5、8 d;细胞通过油红O染色后,直接观察细胞内脂滴堆积情况,并用总胆固醇(TC)酶法测定试剂盒、游离胆固醇(FC)酶法测定试剂盒分别检测各组细胞TC、FC,再通过胆固醇酯(CE)和CE/TC比值定量评估巨噬细胞泡沫化水平。2.各组细胞经100μg/mL MA包被的聚苯乙烯微球作用24h后提取总蛋白,用RT-PCR、Western-blot法检测细胞Coronin-1的表达水平。3.三组细胞经2μmol/L松胞菌素D(ctyD)处理后,分别用(0、25、50、75、100)μg/mL MA包被的聚苯乙烯微球作为吞噬颗粒,分别吞噬24、48、72 h,5、8 d,再次测定其细胞泡沫化水平。4.将ctyD处理细胞(RAW264.7-ctyD、RAW264.7-ctyD-MA)及其对照组分别用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽(FITC-phalloidin)染色,计算纤维型肌动蛋白(F-actin)重排率。5.三组细胞分别经(0、25、50、75、100)μg/mlma包被的聚苯乙烯微球作用24、48、72h,5、8d,通过定磷法测定钙调磷酸酶活性,并用western-blot法测定实验组(100μg/mlma,作用24h)及其对照组细胞的钙调磷酸酶表达水平。结果:1.受不同包被浓度的ma诱导后,表达不同水平coronin-1的各组细胞的泡沫化水平与ma包被剂量和ma作用时间呈正比;coronin-1表达量最高的raw264.7-cor.plus细胞泡沫化水平最高,coronin-1表达量最低的raw264.7-cor.minus细胞泡沫化水平最低,其泡沫化水平呈现的趋势为:raw264.7-cor.plus>raw264.7>raw264.7-cor.minus。2.各组细胞受ma诱导后,其coronin-1的表达量显著高于相应对照组,其表达量从高至低依次为raw264.7-cor.plus、raw264.7、raw264.7-cor.minus。3.ctyd处理组细胞与相应的未处理组相比,ctyd处理组细胞泡沫化水平显著低于其未处理对照组。但是,ctyd处理组细胞泡沫化水平呈现的趋势仍然为:raw264.7-cor.plus>raw264.7>raw264.7-cor.minus。ctyd抑制巨噬细胞f-actin显著降低了ma诱导的泡沫化水平,但抑制f-actin对coronin-1与ma诱导细胞泡沫化的正相关性并无显著影响。4.经荧光素标记的鬼笔环肽染色后,ma诱导组细胞的f-actin重排率显著高于非ma诱导的对照组细胞。5.三组细胞经不同包被浓度ma微球诱导不同时间后,在相同ma包被浓度和相同作用时间下,其钙调磷酸酶活性从高至低依次为:raw264.7-cor.plus>raw264.7>raw264.7-cor.minus,但是,如果ma作用时间为5~8d,三组细胞钙调磷酸酶活性稳定在一个较低水平,差异无显著性;三组细胞经100μg/mL包被浓度的MA微球作用24h后,其钙调磷酸酶的相对表达水平与其活性一致。结论:1.MA可诱导巨噬细胞Coronin-1的表达。2.Coronin-1的表达水平与MA诱导的细胞泡沫化呈正相关。3.F-actin参与了MA诱导的细胞泡沫化过程,但F-actin并非Coronin-1调控MA诱导细胞泡沫化的关键和唯一途径,可能还与钙调磷酸酶等有关。