论文部分内容阅读
本实验对春剑的根状茎进行不同剂量60Co-γ辐射处理，观察辐射后春剑后代的变异情况；建立了ISSR-PCR反应体系，并对春剑组织培养再生苗和60Co-γ辐射诱变处理的可能变异株进行ISSR分子标记，结果如下： 1、确定了适合春剑60Co-γ辐射的最佳剂量，为春剑的辐射诱变育种提供一定的参考。较为详细的观察和统计了辐射后春剑后代的变异情况，包括生长状况、出苗率、褐化率、白化率和死亡率等。 2、用60Co-γ20GY剂量处理的春剑根状茎，再生苗中有一株叶片颜色较浅为可疑突变株，但在DNA水平上未检测到与组培苗的差异。 3、采用改良的CTAB法提取所提样品的基因组DNA，质量较好，杂质较少，满足ISSR反应对DNA的要求，可用此法进行国兰DNA的大规模提取。 4、应用正交设计和单因素相结合的方法对ISSR-PCR反应中引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度四因素在四个水平上进行考察，获得了适于国兰ISSR-PCR反应的体系(25μL)：dNTPs0.2mmol·L-1、引物1.0μmol·L-1、Mg2+2.5mmol·L-1、Taq DNA聚合酶1U。 5、用16种国兰对所建立的ISSR-PCR反应体系进行稳定性考察，所得结果清晰可靠、重复性好、稳定性高。 6、从100条ISSR通用引物中筛选出20条适合国兰ISSR分子标记的引物。所选出的UBC808、UBC809、UBC812等引物多态性高、产物稳定、条带清晰。 7、通过对春剑组织培养再生苗的50个植株样本和60Co-γ辐射处理后代的50个植株样本进行ISSR分子标记。结果组织培养再生苗的变异率为6％，获得3株突变株；60Co-γ辐射诱变后代的植株样本的变异率为18％，有8株植株发生突变。60Co-γ辐射诱变的突变率明显高于组织培养。